一般选择ph9.6的碳酸盐缓冲液。但有时由于试验的需要,包被原的特殊性也可能采用中性的缓冲溶液来包。应注意:
由于蛋白质与聚苯乙烯固相载体是通过物理吸附结合的,靠的是蛋白质分子结构上的疏水基团与固相载体表面的疏水基团间的作用,这种物理吸附是非特异性的,受蛋白质的分子量、等电点、浓度等的影响,大分子蛋白质较小分子蛋白质通常含有更多的疏水基团,故更易吸附到固相载体表面。具体的试验还要有坚固的理论外也要实践,看一下zui终可不可以应用到自己试验当中去。常用的包被液除了刚才提到的pH9.6碳酸盐缓冲液,还有pH7.2的磷酸盐缓冲液和pH7-8的Tris-HCL缓冲液等等。
封闭
继包被之后用高浓度的无关蛋白质溶液再包被的过程。封闭就是让大量不相关的蛋白质充填这些空隙,从而排斥ELISA后的步骤中干扰物质的再吸附。
常用封闭剂有:0.05%-0.5%的BSA;10%的小牛血清或1%明胶;脱脂奶粉,比较价廉,可以高浓度使用(5%-10%);还有一些稀有用到的各种动物血清和酪蛋白等等。但zui终选用什么,要依据试验具体来实践。
洗涤板
可以说在操作中,洗涤是zui主要的关键技术。因为聚苯乙烯等塑料对蛋白质的吸附是普遍性的,为达到分离游离的和结合的酶标记物的目的,清除残留在板孔中游离的物质,以及非特异性地吸附的干扰物质,在洗涤时又应把这种非特异性吸附的干扰物质洗涤下来。所以在洗板时会有一定误差,人为因素很大(当然有条件的用洗板机除外),洗的不*或串了孔,对如此灵敏的ELISA系统可是不小的影响。
STET 缓冲液 500ML 0 STET BUFFER
SOUTHERN 试剂盒(含膜) 10 x 10 square cm 0 TOTAL BLOT SOUTHERN KIT W/ MEMBRANE
SOUTHERN 试剂盒(不含膜) 1 Kit 0 TOTAL BLOT SOUTHERN KIT W/OUT MEMB.
SOC 培养基 100ML 0 SOC MEDIA
SOC 培养基 6x5ml 0 SOC MEDIA
RNA贮存液 12x1ML 0 RIBORESERVE RNA STORAGE SOLUTION
RNA贮存液 50ML 0 RIBORESERVE RNA STORAGE SOLUTION
RNA胶上样试剂盒 100 reactions 0 RNA GEL LOADING KIT
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