操作流程如下：
（1）待测样品孔中每孔参加待测样品100μl，每种样品设3个平行孔；设两个阴性对照孔，每孔加未处理组的细胞裂解液100μl；另设一个空白对照孔，参加纯细胞裂解液100μl。 （2）酶标板置4℃，包被。
（3）洗板：吸干孔内反响液，用洗刷液过洗一遍（将洗刷液注满板孔后，即甩去），之后将洗刷液注满板孔，浸泡1-2分钟，间歇摇摆。甩去孔内液体后在吸水纸上拍干。重复洗刷3-4次。
（4）阴性对照孔每孔参加PBS 50μl，样品孔及空白孔每孔参加1：500稀释的兔抗人AIF抗体工作液50μl。
（5）酶标板置37℃培养箱的湿盒内，孵育60min。
（6）洗板，同（4）。
（7）每孔加1：5000稀释的HRP-标记的山羊抗兔抗体工作液 100μl。
（8）酶标板置37℃培养箱的湿盒内，孵育60min。
（9）洗板，同（4）。
（10）每孔加TMB显色液 100μl，悄悄混匀10s，置37℃暗处反响15-20min。
（11）每孔加100μl 2mol/L H2SO4终止反响。
（12）别离测450nm 吸光值W1和630nm吸光值W2，终究测得的OD值为两者之差（W1-W2），以削减由容器上的划痕或指印等形成的光干扰。
（13）数据处理：在得出标本（S）和阴性对照（N）的 OD值后，核算S/N值。S/N≥2.1为阳性断定规范。
注：所用溶液配方
(1) PBS：称取0.2g KH2P04, 2.9g Na2HP04?12H20、8.0g NaCl, 0.2g KCl，加双蒸水至1000ml。
（2）包被缓冲液：称取1.59g Na2CO3, 2.938 NaHCO3，加双蒸水至 1000m1。
（3）洗刷液(PBST)：含0.05% Tween-20的PBS。
（4）稀释液：含0.1%牛血清白蛋白(BSA)的PBS，首要用以稀释抗体、规范品、样品。
（5）TMB显色液：称取1.84g Na2HP04.12H20, 0.51 g柠檬酸，加双蒸水至1O0ml，配成柠檬酸-磷酸缓冲溶液。用10.5 ml 柠檬酸-磷酸缓冲溶液溶解1锭TMB，再参加35μl 3% H2O2
（6）细胞裂解液：1% TritonX-100，137mmol/L NaCl，20mmol/L Tris-HCl，2mmol/L EDTA，1mmol/L PMSF，pH 7.4。（其间PMSF溶于异丙醇中，配成1O mmo/L，-20℃ 储存备用。
Carnosol    20mg    鼠尾草酚    5957-80-2
Caryophyllene oxide    20mg    石竹素    1139-30-6
Catalpol    20mg    梓醇    2415-24-9
Catechin    20mg    儿茶精； 儿茶素； (2R,3S)-2-(3,4-二羟基苯基)-3,4-二氢-2H-苯并吡喃-3,5,7-三醇    154-23-4
Caudatin    20mg    告达亭苷元    38395-02-7
Celastrol    20mg    红素; 南蛇藤素    34157-83-0
Cephalomannine    20mg    三尖杉宁碱    71610-00-9
Cepharanthine    20mg    千金藤素    481-49-2

 

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