操作步骤

1.  标准品的稀释： 本试剂盒提供原倍标准品一支， 用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。

100pg/ml  5 号标准品  150μl 的原倍标准品加入 150μl 标准品稀释液

50pg/ml  4 号标准品  150μl 的 5 号标准品加入 150μl 标准品稀释液

25pg/ml  3 号标准品  150μl 的 4 号标准品加入 150μl 标准品稀释液

12.5pg/ml  2 号标准品  150μl 的 3 号标准品加入 150μl 标准品稀释液

6.25pg/ml  1 号标准品  150μl 的 2 号标准品加入 150μl 标准品稀释液

2.  加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同） 、标准孔、待测样品孔。 在酶标包被板上标准品准确加样 50μl， 待测样品孔中先加样品稀释液 40μl，然后再加待测样品 10μl（样品zui终稀释度为 5 倍） 。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。

3.  温育：用封板膜封板后置 37℃温育 30 分钟。

4.  配液：将 30 倍浓缩洗涤液用蒸馏水 30 倍稀释后备用

5.  洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置 30 秒后弃去，如此

重复 5 次，拍干。

6.  加酶：每孔加入酶标试剂 50μl，空白孔除外。

7.  温育：操作同 3。

8.  洗涤：操作同 5。

9.  显色：每孔先加入显色剂 A50μl，再加入显色剂 B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色

10 分钟.

10. 终止：每孔加终止液 50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色） 。

11. 测定：以空白空调零，450nm 波长依序测量各孔的吸光度（OD 值） 。 测定应在加终止液后 15 分钟以内进行。

计算：

以标准物的浓度为横坐标，OD 值为纵坐标，在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的

OD 值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与 OD 值计算出标准曲线的直线回归方程式， 将样品的 OD 值代入方程式， 计算出样品浓度， 再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。

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