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斑点气单胞菌PCR检测试剂盒对照反应
点击次数:765 更新时间:2020-05-21

          PCR完成后,建议将反应液于1000× g (大约4000 rpm) 离心1~3 min以沉淀血细胞碎片,之后取上清进行下游分析。该步骤可有效去除多种血液组分。当使用高浓度血液模板时此步尤为重要,因为经过PCR循环,反应管中会存在大量的血细胞碎片。这些碎片会干扰下游的检测,如琼脂糖电泳检测。注意:由于血液本身的原因,PCR 结束后在 PCR 管的底部会出现透明凝胶状物质,此为正常现象。

对照反应

在PCR结果分析时,不管是阳性结果或阴性结果,如果没有对照反应,都不能确定结果是否可靠。为了便于后续实验结果的分析,建议在进行PCR时,设置阳性和阴性PCR对照反应以便于排除假阳性或假阴性的干扰。

a)模板DNA:选用样本纯化的DNA。

b)引物的选择:建议选择该样本较易扩增的基因的引物,如 β-actin 基因或 GAPDH 等。

4.2 阴性对照

PCR反应体系被污染会导致PCR结果出现假阳性,需要设置阴性对照来排除。将使用的移液器枪头浸泡在2× Blood Master Mix中,添加引物,ddH2O进行PCR扩增;另取ddH2O作为模板,用目的基因引物进行PCR扩增,以排除PCR体系是否被污染和实验是否有其他污染源。

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