产品仅供研究使用，不适用于人类或临床诊断
商品属性：

产品英文名称：Comet Assay Kit (3-Well Slides)

产品中文名称：彗星法DNA损伤分析试剂盒（3孔载玻片）

规格：15T/75T

货号：EY-01X8530
用途：仅供科研研究实验

特点&优势:

•  试剂齐全：提供的彗星玻片；

•  操作简便：无需用不同熔点琼脂糖繁琐铺胶，可快速、灵敏的检测细胞 DNA 损伤；

•  可靠：相比于多层琼脂糖，样本不易脱落。

保存建议:从发货之日起，4℃，避光保存 6 个月

运输条件:蓝冰运输

背景

彗星法 DNA 损伤分析试剂盒（3 孔载玻片）是一种单细胞凝胶电泳试验（SCGE），快速、灵敏的检测细胞 DNA 损伤的试剂盒。 其检测原理是器官或组织经处理（如辐射、重金属等）后，细胞中的 DNA 发生单链或双链断裂，将细胞与融化的琼脂糖混合加在载玻片上，然后用裂解液破坏细胞膜，再用碱性溶液使 DNA 解旋，后，对样品进行电泳，在电场作用下，正常细胞的大分子 DNA 在电场作用下迁移距离较短，完整 DNA 仍保留在细胞核的范围，DNA 断裂碎片迁移出细胞核，用 PI 染料染色，在荧光显微镜下观察，完整 DNA 形成圆形或轻微拖尾的图谱；DNA 断裂碎片形成彗星状的电泳图谱。

本产品具有下列特点:

 1.操作简便、快捷。可直接加入到检测平板。在96-孔板中检测时,无需洗涤或收获细胞,免去溶解步骤。

2. 无放射性。不需要配制液闪混合物,也不需要处理废弃物。

3. 与MTT相比,使用更安全。不需要使用挥发性的有机溶剂来溶解甲臜产物。

4. 操作灵活,与MTT不同,平板读数后可放回温箱继续孵育,使颜色进一步生成。
公司正在出售的产品：

5(KLK5)重组蛋白 Recombinant Kallikrein 5 (KLK5)

CPA1 Protein Human 重组人 Carboxypeptidase A1 / CPA1 蛋白

CSF1重组小鼠 M-CSF / CSF-1 蛋白 Protein

RBP4 Protein Canine 重组狗 RBP4 蛋白 (Fc 标签)

FAM171B重组人 FAM171B / KIAA1946 蛋白 Protein

小鼠(LZM)ELISA 试剂盒 96T/48T

Human cysticercosis aibody (CYT Ab) ELISA Kit 人囊虫病抗体(CYT Ab)检测试剂盒

Humanvimein,VIMELISAKit 人波形蛋白(VIM)检测试剂盒 96T/48T 进口分装

guineapigHistamine,HIS检测试剂盒豚鼠组胺(HIS)检测试剂盒规格：96T/48T

真菌/酵母细胞β-半乳糖苷酶活性比色法定量检测试剂盒20次

Mousecatecholamine,CAELISAKit小鼠儿茶酚胺(CA)检测试剂盒规格：96T/48T

小鼠尿微量白蛋白（ALB）检测试剂盒   96T/48T   试剂盒   组装/原装

小鼠型纤溶酶原激活物受体(PLAUR/uPAR)检测试剂盒   96T/48T   试剂盒   组装/原装

小鼠型纤溶酶原激活物(uPA)检测试剂盒   96T/48T   试剂盒   组装/原装

小鼠尿蛋白（UP）检测试剂盒   96T/48T   试剂盒   组装/原装

大鼠Ⅵ(F6)检测试剂盒 ，英文名： F6 ELISA Kit

Mouse thrombospondin / thrombin sensitive protein 1 (TSP-1) ELISA Kit 小鼠血小板反应蛋白/敏感蛋白1(TSP-1)检测试剂盒

Ratcross-linkedC-telopeptidesofTypeⅠcollagen,CⅠCPELISAKit 大鼠Ⅰ型前胶原C末端肽(CⅠCP)检测试剂盒 96T/48T 进口分装

CLIAKitforGOT/GPT(HumanAspaateaminoansferase)ELISAKit人天门冬转氨酶/谷草转氨酶

细胞短链脂酰氧化酶(acyl-CoAoxidase)活性比色法定量检测试剂盒20次

Ratthrombomodulin,TMELISAKit大鼠血栓调节蛋白(TM)检测试剂盒规格：96T/48T

彗星法DNA损伤分析试剂盒（3孔载玻片）CSF1重组小鼠 M-CSF / CSF-1 蛋白 Protein

5(KLK5)重组蛋白 Recombinant Kallikrein 5 (KLK5)

FAM171B重组人 FAM171B / KIAA1946 蛋白 Protein

CPA1 Protein Human 重组人 Carboxypeptidase A1 / CPA1 蛋白

RBP4 Protein Canine 重组狗 RBP4 蛋白 (Fc 标签)

操作步骤：

(一)获得目的基因

1、通过PCR方法:以含目的基因的克隆质粒为模板,按基因序列设计一对引物(在上游和下游引物分别引入不同的酶切位点),PCR循环获得所需基因片段。

2、通过RT-PCR方法:用TRIzol法从细胞或组织中提取总RNA,以mRNA为模板,逆转录形成cDNA第一链,以逆转录产物为模板进行PCR循环获得产物。

(二)构建重组表达载体

1、载体酶切:将表达质粒用限制性内切酶(同引物的酶切位点)进行双酶切,酶切产物行琼脂糖电泳后,用胶回收Kit或冻融法回收载体大片段。

2、PCR产物双酶切后回收,在T4DNA连接酶作用下连接入载体。

(三)  获得含重组表达质粒的表达菌种

1、 将连接产物转化大肠杆菌DH5α,根据重组载体的标志(抗Amp或蓝白斑)作筛选,挑取单斑,碱裂解法小量抽提质粒,双酶切初步鉴定。

2、 测序验证目的基因的插入方向及阅读框架均正确,进入下步操作。否则应筛选更多克隆,重复亚克隆或亚克隆至不同酶切位点。

3、 以此重组质粒DNA转化表达宿主菌的感受态细胞。

(四)诱导表达

1、挑取含重组质粒的菌体单斑至2ml LB(含Amp50μg/ml)中37℃过夜培养。

2、按1∶50比例稀释过夜菌,一般将1ml菌加入到含50mlLB培养基的300ml培养瓶中, 37℃震荡培养至OD600≌0.4-1.0(*0.6,大约需3hr)。

3、取部分液体作为未诱导的对照组,余下的加入IPTG诱导剂至终浓度0.4mM作为实验组,两组继续37℃震荡培养3hr。

4、分别取菌体1ml, 离心12000g×30s收获沉淀,用100μl 1%SDS重悬,混匀, 70℃10min。

5、离心12000g×1min,取上清作为样品,可做SDS-PAGE等分析。