产品仅供研究使用，不适用于人类或临床诊断
商品属性：

产品英文名称：Annexin V-AbFluor•  488/PI Apoptosis Detection kit

产品中文名称：488/PI双染细胞凋亡检测试剂盒

规格：50T/100T

货号：EY-01X8544
用途：仅供科研研究实验

特点&优势:

•AbFluor•  488 是FITC的替代物，不仅荧光强度和光稳定性更好，而且不受pH的影响

•  Annexin V- AbFluor•  488: Ex/Em = 491/517 nm; PI: Ex/Em = 535/617 nm (DNA染料)

•  适用于流式细胞术和荧光显微镜

保存建议:-20℃，避光保存12个月。

运输条件:蓝冰运输

背景

细胞凋亡（apoptosis）是一种基本生物学现象，指为维持内环境稳定，由基因控制的细胞自主的有序的死亡，在多细胞生物去除不需要的或异常的细胞中起着必要的作用。在正常活细胞中，磷脂酰（PS）位于细胞膜的内侧，而在细胞凋亡的早期，PS可从细胞膜的内侧翻转到细胞膜的表面，暴露在细胞外环境中。膜联蛋白V(Annexin V) 是一种分子量为35~36KDa的钙离子依赖型磷脂结合蛋白，能与PS高亲和力特异性结合。通过荧光素或者标记Annexin V即可简单快速地直接检测出细胞早期凋亡情况。 碘化丙啶（propidine iodide，PI）是一种核酸染料，它不能透过完整的细胞膜，而早期凋亡细胞的细胞膜是完好的，对PI有拒染性。但在凋亡中晚期的细胞和死细胞，PI能透过细胞膜而使细胞核染上。因此将Annexin V 与PI 匹配使用，就可以将凋亡早晚期的细胞以及死细胞区分开来。PI可以被488,532或546nm激光线激发，并发出红色荧光。

本产品具有下列特点:

 1.操作简便、快捷。可直接加入到检测平板。在96-孔板中检测时,无需洗涤或收获细胞,免去溶解步骤。

2. 无放射性。不需要配制液闪混合物,也不需要处理废弃物。

3. 与MTT相比,使用更安全。不需要使用挥发性的有机溶剂来溶解甲臜产物。

4. 操作灵活,与MTT不同,平板读数后可放回温箱继续孵育,使颜色进一步生成。
公司正在出售的产品：

A/H1N1-M2 Swine(Avian influenza Matrix Protein-2 Swine 0.5mgA/H1N1-M2 Swine(Avian influenza Matrix Protein-2 Swine) A型猪流感病毒H1N1-M2蛋白

IL21R Protein Human 重组人 IL-21R / Interleukin-21 Receptor 蛋白

CDH1重组小鼠 E-Cadherin / CDH1 / E-cad / CD324 蛋白 Protein

EFNB1 Protein Rat 重组大鼠 Ephrin-B1 / EFNB1 蛋白 (Fc 标签)

USP46重组人 / 小鼠 USP46 蛋白 (SUMO 标签) Protein

豚鼠过氧化脂质/乳过氧化物酶(LPO)检测试剂盒 ，英文名： LPO ELISA Kit

Human hepatitis D virus IgM (HDV IgM) ELISA Kit 人丁型肝IgM(HDV IgM)检测试剂盒

Rabbitglialfibrillaryacidicprotein,GFAPELISAKit 兔子神经胶质纤维酸性蛋白(GFAP)检测试剂盒 96T/48T 进口分装

CLIAKitforbFGF(Humanbasicfibroblastgrowthfactor)ELISAKit人碱性成纤维细胞生长因子

细菌色酶原位染色检测试剂盒20次

RabbitIerleukin10,IL-10ELISAKit兔子白介素10(IL-10)检测试剂盒规格：96T/48T

人总前列腺特异抗原(tPSA)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

人抗人类免疫缺陷病毒抗体(HIV)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

人解脲脲原体抗体(UU-Ab)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

人复合前列腺特异性抗原(CPSA)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

小鼠乳铁传递蛋白/乳铁蛋白(LF/LTF)ELISA 试剂盒

Human visceral adipose specific serine protease inhibitor (vaspin) ELISA Kit 人内脏脂肪特异性丝蛋白酶抑制剂(vaspin)检测试剂盒

Humanpan-cytokeratin,P-CKELISAKit 人广谱细胞角蛋白(P-CK)检测试剂盒 96T/48T 进口分装

GuineapigGrowthhormone,GH检测试剂盒豚鼠生长激素(GH)检测试剂盒规格：96T/48T

真菌/酵母酸性0酸酶总活性比色法定量检测试剂盒20次

Mousec-fosELISAKit小鼠c-fos检测试剂盒规格：96T/48T

488/PI双染细胞凋亡检测试剂盒DDR1重组小鼠 DDR1 Kinase / MCK10 / CD167 蛋白 (His & GST 标签) Protein

蛋白激酶Cδ(PKCδ)重组蛋白 Recombinant Protein Kinase C Delta (PKCd)

AHSP重组人 AHSP / ERAF 蛋白 Protein

IL21R Protein Human 重组人 IL-21R / Interleukin-21 Receptor 蛋白

FGFR4 Protein Cynomolgus 重组食蟹猴 FGFR4 / FGF Receptor 4 蛋白 (Fc 标签)

操作步骤：

(一)获得目的基因

1、通过PCR方法:以含目的基因的克隆质粒为模板,按基因序列设计一对引物(在上游和下游引物分别引入不同的酶切位点),PCR循环获得所需基因片段。

2、通过RT-PCR方法:用TRIzol法从细胞或组织中提取总RNA,以mRNA为模板,逆转录形成cDNA第一链,以逆转录产物为模板进行PCR循环获得产物。

(二)构建重组表达载体

1、载体酶切:将表达质粒用限制性内切酶(同引物的酶切位点)进行双酶切,酶切产物行琼脂糖电泳后,用胶回收Kit或冻融法回收载体大片段。

2、PCR产物双酶切后回收,在T4DNA连接酶作用下连接入载体。

(三)  获得含重组表达质粒的表达菌种

1、 将连接产物转化大肠杆菌DH5α,根据重组载体的标志(抗Amp或蓝白斑)作筛选,挑取单斑,碱裂解法小量抽提质粒,双酶切初步鉴定。

2、 测序验证目的基因的插入方向及阅读框架均正确,进入下步操作。否则应筛选更多克隆,重复亚克隆或亚克隆至不同酶切位点。

3、 以此重组质粒DNA转化表达宿主菌的感受态细胞。

(四)诱导表达

1、挑取含重组质粒的菌体单斑至2ml LB(含Amp50μg/ml)中37℃过夜培养。

2、按1∶50比例稀释过夜菌,一般将1ml菌加入到含50mlLB培养基的300ml培养瓶中, 37℃震荡培养至OD600≌0.4-1.0(*0.6,大约需3hr)。

3、取部分液体作为未诱导的对照组,余下的加入IPTG诱导剂至终浓度0.4mM作为实验组,两组继续37℃震荡培养3hr。

4、分别取菌体1ml, 离心12000g×30s收获沉淀,用100μl 1%SDS重悬,混匀, 70℃10min。

5、离心12000g×1min,取上清作为样品,可做SDS-PAGE等分析。