细胞简介：

大鼠表皮角化分离自皮肤组织；表皮位于动物皮肤的外层，由胚胎时期外胚层形成，具有抗摩擦和抗损伤的作用。表皮是皮肤的浅层结构，由复层扁平上皮构成。从基底层到表面可分为五层，即基底层、棘层、颗粒层、透明层和角质层。表皮角化细胞（KC）是构成表皮的主要细胞成分，在体内处于不断增殖过程中，分裂的角化细胞主要位于其基底层，少数位于棘细胞层。随着向表层的推移，细胞的分化程度逐渐增加，并丧失分裂活性。

方法简介：

公司实验室分离的大鼠表皮角化上皮先消化、后-胶原酶混合消化法制备而来，细胞总量约为5×10?cells/瓶。

质量检测

公司实验室分离的大鼠表皮角化上皮经PCK免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

培养信息：

包被条件 鼠尾胶原Ⅰ（2-5μg/cm2）

培养基 含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等

换液频率 每2-3天换液一次

生长特性 贴壁

细胞形态 上皮细胞样

传代特性 可传1-3代左右；2代以内状态好

消化液 0.25%

培养条件 气相：空气，95%；CO2，5%

实验报告：

一、分离与培养：

1、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次，将组织剪成1mm3左右大小；

2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶），混悬10s，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；

3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次，直至组织被消化；

4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养；

5、差速贴壁1h后，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养；二、免疫荧光鉴定：

1、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min；

2、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min；

4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；

5、PBS冲洗细胞3次，每次10min，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h；

6、用PBS冲洗3次，每次10min，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。

公司正在出售的产品：

大鼠白介素12(IL-12)检测试剂盒 ，英文名： IL-12 ELISA Kit

Rabbit basic fibroblast growth factor (bFGF) ELISA Kit 兔子碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)检测试剂盒

ELISA 小鼠瘦素(mouse Leptin)  进口分装

CLIAKitforIL-27(MouseIerleukin27)ELISAKit小鼠白介素27

通用型球菌(Staphylococcusaureus)试剂盒20次

ELISAKitPDGF-BB大鼠血小板衍生生长因子BB

SPARC重组小鼠 Osteonectin / SPARC 蛋白 Protein

ANGPTL1/ANG-1 (Angiopoietin-like Protein 1 0.5mgANGPTL1/ANG-1 (Angiopoietin-like Protein 1) 血管位蛋白样1/血管生成素样蛋白-1抗原

AMPK重组人 AMPK (G1/B1/A1) Heterotrimer 蛋白 Protein

CAMK2B Protein Human 重组人 CAMK2B / CaMKII-beta 蛋白 (His & GST 标签)

CD38 Protein Rat 重组大鼠 SCARB3 蛋白 (Fc 标签)

白血病抑制因子受体(LIFR)重组蛋白 Recombinant Leukemia Inhibitory Factor Receptor (LIFR)

CAMK2B Protein Human 重组人 CAMK2B / CaMKII-beta 蛋白 (His & GST 标签)

CPA2重组小鼠 Carboxypeptidase A2 / CPA2 蛋白 Protein

IL6ST Protein Cynomolgus 重组食蟹猴 IL6ST / gp130 蛋白 (Fc 标签)

EPHB2重组人 EphB2 / Hek5 蛋白 Protein

鸭病毒性肠病毒(DEV)ELISA 试剂盒 96T/48T

Human ai-pl7-aibody (ai-cailage-Ab) ELISA Kit 人抗软骨抗体(ai-cailage-Ab)检测试剂盒

HumanEndotheliallipase,ELELISAKit 人内皮脂肪酶(EL)检测试剂盒 96T/48T 进口分装

CLIAKitforACSELISAKit大鼠脂酰合成酶

亚甲基蓝(METHYLENEBLUE)复染试剂盒50次

MouseplateletaibodiesIgG/M/A,PA-IgG/M/AELISAKit小鼠抗血小板抗体IgG/M/A(PA-IgG/M/A)检测试剂盒规格：96T/48T

大鼠表皮角化上皮细胞英文名称：   Total Niic Oxide   规格：      英文缩写：   NO

自然杀伤细胞   英文名称：   Natural killer Cells   规格：      英文缩写：   NK

杆菌抗体   英文名称：   Mycobacterium Tuberculosis Aibody   规格：      英文缩写：   TB

谷酰胺   英文名称：   ansglaminase   规格：      英文缩写：   TG

注意事项：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象，若有上述现象发生请及时和尊龙凯时联系。

2. 仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息，如细胞形态、所用培养基、血清比例、所需细胞因子等，确保细胞培养条件一致，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题，责任由客户自行承担。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面，显微镜下观察细胞状态。因运输问题，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片，是正常现象。观察好细胞状态后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h。

4. 贴壁细胞可以消化，悬浮细胞直接混匀收集细胞，900 rpm-1000 rpm离心3 min，弃上清。加5 mL PBS重悬细胞，再900 rpm-1000 rpm离心3 min，，用新鲜的*培养基重悬细胞，并接种到新的培养瓶或培养皿中，置于培养箱中进行培养。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片，记录细胞状态，便于和我司技术部沟通交流。由于运输的原因，个别敏感细胞会出现不稳定的情况，请及时和尊龙凯时联系，告知细胞的具体情况，以便尊龙凯时的技术人员跟踪回访直至问题解决。

7. 该细胞仅供科研使用。

8. 备注：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞。收到细胞后次传代建议1：2传代 。

9.注意： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿。不是1个T25瓶传2个10cm皿。