细胞简介：

大鼠股骨头微血管内皮分离自骨组织；股骨头（caput femoris）呈圆形，约占一圆球的2/3，其上为关节软骨所覆盖，在其顶部微后有一小窝，称为股骨头凹，为股骨头韧带附着处，股骨头可由此获得少量血供。股骨头骨髓的微血管结构为珊瑚状，后毛细血管微动脉与微静脉部分膨大、迂曲、互相缠绕；骨微血管内皮细胞构成了骨内微血管的内衬，与骨内其他成分联系密切，参与了许多骨的病理生理过程在骨吸收新骨的形成血管再生营养物质转运骨内代谢产物输出及维持骨内微环境平衡方面具有重要作用。

方法简介：

实验室分离的大鼠股骨头微血管内皮采用混合胶原酶消化制备而来，细胞总量约为5×10⁵cells/瓶。

质量检测

实验室分离的大鼠股骨头微血管内皮经CD31免疫荧光鉴定，细胞纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、 HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

培养信息：

包被条件：PLL（0.1mg/ml），明胶（0.1%）

培养基：基础培养基，含FBS、EGF、bFGF、IGF、VEGF、Heparin、Hydrocortisone、Penicillin、Streptomycin等

换液频率：每2-3天换液一次

生长特性：贴壁

细胞形态：内皮细胞样

传代特性：可传1-3代左右；2代以内状态

消化液：0.25%，Accutase

培养条件：气相：空气，95%；CO2，5%

大鼠股骨头微血管内皮体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的培养状态。

实验报告：

一、分离与培养：

1、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次，将组织剪成1mm3左右大小；

2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶），混悬10s，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；

3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次，直至组织被消化；

4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养；

5、差速贴壁1h后，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养；二、免疫荧光鉴定：

1、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min；

2、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min；

4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；

5、PBS冲洗细胞3次，每次10min，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h；

6、用PBS冲洗3次，每次10min，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。

公司正在出售的产品：

大鼠释放激素受体抗体(GHR-Ab)检测试剂盒 ，英文名： GHR-Ab ELISA Kit

Porcine ansforming growth factor beta 1 (TGF- beta 1) ELISA Kit 猪转化生长因子β1(TGF-β1)检测试剂盒

ELISA 小鼠细胞凋亡相关基因(mouse BCL-2)  进口分装

CLIAKitforLLO(HumanlisteriolysinO)ELISAKit人单核细胞增多性李斯特菌素O

通用型DNA氧化损伤AP位点比色法定量分析试剂盒20次

ELISAKitPAL鸡L苯解氨酶

SELP重组大鼠 SELP / P Selectin 蛋白 (Fc 标签) Protein

COMP 软骨寡聚基质蛋白抗原 0.5mgCOMP 软骨寡聚基质蛋白抗原

ISG15重组人 ISG15 / G1P2 蛋白 Protein

CCL11 Protein Human 重组人 CCL11 蛋白

SELL Protein Mouse 重组小鼠 CD62L / L-Selectin / SELL 蛋白

COMP 软骨寡聚基质蛋白抗原 0.5mgCOMP 软骨寡聚基质蛋白抗原

CCL11 Protein Human 重组人 CCL11 蛋白

SELP重组大鼠 SELP / P Selectin 蛋白 (Fc 标签) Protein

SELL Protein Mouse 重组小鼠 CD62L / L-Selectin / SELL 蛋白

ISG15重组人 ISG15 / G1P2 蛋白 Protein

小鼠中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(NGAL)ELISA 试剂盒 96T/48T

Human ai insulin receptor aibody (AIRA) ELISA Kit 人抗胰岛素受体抗体(AIRA)检测试剂盒

HumanArachidonicAcid,AAELISAKit 人花生四烯酸(AA)检测试剂盒 96T/48T 进口分装

CLIAKitforABCA1(HumanATP-bindingcassetteanspoerA1)ELISAKit人腺苷三0酸结合盒转运体A1

伊文思蓝(EVANSBLUE)植物细胞繁殖测定试剂盒100次

Mousenicotinamideadeninedinucleotidephosphate,NADPHELISAKit小鼠腺嘌呤二核苷酸0酸(NADPH)检测试剂盒规格：96T/48T

大鼠股骨头微血管内皮细胞血小板膜糖蛋白 (GP IIb/IIIa)   作用：   ELISA   规格：      进口分装

生长相关因子 (GRO)    作用：   ELISA   规格：      进口分装

生长相关因子 α(GRO α)   作用：   ELISA   规格：      进口分装

过氧化物酶 (GSH-Px)   作用：   ELISA   规格：      进口分装

注意事项：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象，若有上述现象发生请及时和尊龙凯时联系。

2. 仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息，如细胞形态、所用培养基、血清比例、所需细胞因子等，确保细胞培养条件一致，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题，责任由客户自行承担。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面，显微镜下观察细胞状态。因运输问题，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片，是正常现象。观察好细胞状态后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h。

4. 贴壁细胞可以消化，悬浮细胞直接混匀收集细胞，900 rpm-1000 rpm离心3 min，弃上清。加5 mL PBS重悬细胞，再900 rpm-1000 rpm离心3 min，，用新鲜的*培养基重悬细胞，并接种到新的培养瓶或培养皿中，置于培养箱中进行培养。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片，记录细胞状态，便于和我司技术部沟通交流。由于运输的原因，个别敏感细胞会出现不稳定的情况，请及时和尊龙凯时联系，告知细胞的具体情况，以便尊龙凯时的技术人员跟踪回访直至问题解决。

7. 该细胞仅供科研使用。

8. 备注：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞。收到细胞后次传代建议1：2传代 。

9.注意： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿。不是1个T25瓶传2个10cm皿。