实验报告：

一、分离与培养：

1、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次，将组织剪成1mm3左右大小；

2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶），混悬10s，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；

3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次，直至组织被消化；

4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养；

5、差速贴壁1h后，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养；二、免疫荧光鉴定：

1、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min；

2、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min；

4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；

5、PBS冲洗细胞3次，每次10min，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h；

6、用PBS冲洗3次，每次10min，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。

细胞简介：

大鼠卵巢上皮分离自卵巢组织；卵巢是雌性动物的生殖器官，卵巢的功能是产生卵以及类固醇激素。卵巢的位置与睾丸相同，仅左侧发育（右侧已退化），呈葡萄状，均为处于不同发育时期的卵泡，卵泡呈黄色，卵巢表面密布血管。卵巢的大小与年龄和产卵期有关。大多数脊椎动物有两个卵巢，但是部分鱼类的两个卵巢融合为单个结构，而所有鸟类只有左侧卵巢有机能。卵巢是位于子宫两侧的一对卵圆形的生殖器官，它的外表有一层上皮组织，其下方有薄层的结缔组织。卵巢的内部结构可分为皮质和髓质。皮质位于卵巢的周围部分，主要由卵泡和结缔组织构成；髓质位于中央，由疏松结缔组织构成，其中有许多血管、淋巴管和神经。卵巢上皮细胞主要功能：①上皮细胞能分泌激素，刺激卵细胞分化成熟；②细胞能分泌炎症介质，参与炎症反应。

方法简介：

公司实验室分离的大鼠卵巢上皮采用-胶原酶联合消化法结合差速贴壁法，并通过上皮细胞专用培养基培养筛选制备而来，细胞总量约为5×10?cells/瓶。

质量检测

公司实验室分离的大鼠卵巢上皮经Cytokeratin-19免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

培养信息：

包被条件 鼠尾胶原Ⅰ（2-5μg/cm2）

培养基 含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等

换液频率 每2-3天换液一次

生长特性 贴壁

细胞形态 上皮细胞样

传代特性 可传1-2代

消化液 0.25%

培养条件 气相：空气，95%；CO2，5%

注意事项：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象，若有上述现象发生请及时和尊龙凯时联系。

2. 仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息，如细胞形态、所用培养基、血清比例、所需细胞因子等，确保细胞培养条件一致，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题，责任由客户自行承担。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面，显微镜下观察细胞状态。因运输问题，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片，是正常现象。观察好细胞状态后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h。

4. 贴壁细胞可以消化，悬浮细胞直接混匀收集细胞，900 rpm-1000 rpm离心3 min，弃上清。加5 mL PBS重悬细胞，再900 rpm-1000 rpm离心3 min，，用新鲜的*培养基重悬细胞，并接种到新的培养瓶或培养皿中，置于培养箱中进行培养。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片，记录细胞状态，便于和我司技术部沟通交流。由于运输的原因，个别敏感细胞会出现不稳定的情况，请及时和尊龙凯时联系，告知细胞的具体情况，以便尊龙凯时的技术人员跟踪回访直至问题解决。

7. 该细胞仅供科研使用。

8. 备注：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞。收到细胞后次传代建议1：2传代 。

9.注意： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿。不是1个T25瓶传2个10cm皿。

公司正在出售的产品：

大鼠肝细胞生长因子激活物(HGFA)检测试剂盒 ，英文名： HGFA ELISA Kit

Porcine leukemia inhibitory factor receptor (LIFR) ELISA Kit 猪白血病抑制因子受体(LIFR)检测试剂盒

蜡样芽孢杆菌(BC)核酸检测试剂盒(PCR-荧光探针法) 48T

CLIAKitforMDA(Humanmalondialchehyche)ELISAKit人二

体液人类巨细胞病毒蛋白酶(HCMVPROTEASE)活性荧光淬灭法定量检测试剂盒20次

ELISAKitE2牛雌二醇

HPGD重组小鼠 HPGD / 15-PGDH 蛋白 Protein

Bcl2样蛋白11(BCL2L11)重组蛋白 Recombinant Bcl2 Like Protein 11 (BCL2L11)

TMED1重组人 TMED1 蛋白 (Fc 标签) Protein

CCL8 Protein Human 重组人 CCL8 / MCP-2 蛋白 (SUMO 标签)

IL6ST Protein Rat 重组大鼠 gp130 / IL6ST / CD130 蛋白

Smad同源物7(Smad7)重组蛋白 Recombinant Mothers Against Decapentaplegic Homolog 7 (Smad7)

CCL8 Protein Human 重组人 CCL8 / MCP-2 蛋白 (SUMO 标签)

CHODL重组小鼠 CHODL / Chondrolectin 蛋白 Protein

NOV Protein Cynomolgus 重组食蟹猴 / 恒河猴 CCN3 / NOV 蛋白

CNPY2重组人 CNPY2 蛋白 Protein

小鼠乙型肝e抗原(HBeAg)ELISA 试剂盒 96T/48T

Human soluble cluster of differeiation 30 ligand (sCD30L) ELISA Kit 人可溶性白细胞分化抗原30配体(sCD30L)检测试剂盒

Humanaconitase2,ACO-2ELISAKit 人乌头酸酶2(ACO-2)检测试剂盒 96T/48T 进口分装

CLIAKitfor5-(Mouse5-Nucleotidase)ELISAKit小鼠5核苷酸酶

饮料L-乳酸比色法定量检测试剂盒20次

MouseMacrophage-DerivedChemokine,MDCELISAKit小鼠巨噬细胞来源的趋化因子(MDC/CCL22)检测试剂盒规格：96T/48T

大鼠卵巢上皮细胞溴甲酚紫   5g

BromocresolPurple,FreeAcid   25g

溴酚兰   10g

BromophenolBlue   50g