实验报告：

一、分离与培养：

1、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次，将组织剪成1mm3左右大小；

2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶），混悬10s，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；

3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次，直至组织被消化；

4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养；

5、差速贴壁1h后，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养；二、免疫荧光鉴定：

1、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min；

2、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min；

4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；

5、PBS冲洗细胞3次，每次10min，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h；

6、用PBS冲洗3次，每次10min，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。

细胞简介：

大鼠胚胎肝母分离自胚胎肝组织；肝脏是身体内以代谢功能为主的一个器官，并在身体里面起着去氧化、储存肝糖、分泌性蛋白质的合成等作用；肝脏也制造消化系统中之胆汁。肝脏是机体内脏里最大的器官，位于机体中的腹部位置，在右侧横隔膜之下，位于胆囊之前端且于右边肾脏的前方，胃的上方。肝脏是机体消化系统中最大的消化腺，为一红棕色的V字形器官。肝脏是尿素合成的主要器官，又是新陈代谢的重要器官。肝脏起源于腹侧前肠内胚层细胞（一种多潜能干细胞）。在 ED8.5 的小鼠和 ED9.5 的大鼠，前肠的原始上皮细胞接触心肌中胚层后快速增殖，形成肝原基。大约1d后，原始上皮细胞侵入原始横膈，继续分化为幼稚肝脏上皮细胞，这些细胞先表达 AFP 然后是ALb。幼稚肝脏上皮细胞很快成熟，并进一步分化为肝细胞或胆管上皮细胞，因为此期的肝脏上皮细胞其具有向这两种肝实质细胞双向分化的潜能，所以又称肝母细胞。

方法简介：

公司实验室分离的大鼠胚胎肝母采用胶原酶消化法制备而来，细胞总量约为5×10?cells/瓶。

质量检测

公司实验室分离的大鼠胚胎肝母经PCK免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

培养信息：

包被条件 鼠尾胶原Ⅰ（2-5μg/cm2）

培养基 含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等

换液频率 每2-3天换液一次

生长特性 贴壁

细胞形态 上皮细胞样

传代特性 可传2-3代左右

消化液 0.25%

培养条件 气相：空气，95%；CO2，5%

注意事项：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象，若有上述现象发生请及时和尊龙凯时联系。

2. 仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息，如细胞形态、所用培养基、血清比例、所需细胞因子等，确保细胞培养条件一致，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题，责任由客户自行承担。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面，显微镜下观察细胞状态。因运输问题，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片，是正常现象。观察好细胞状态后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h。

4. 贴壁细胞可以消化，悬浮细胞直接混匀收集细胞，900 rpm-1000 rpm离心3 min，弃上清。加5 mL PBS重悬细胞，再900 rpm-1000 rpm离心3 min，，用新鲜的*培养基重悬细胞，并接种到新的培养瓶或培养皿中，置于培养箱中进行培养。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片，记录细胞状态，便于和我司技术部沟通交流。由于运输的原因，个别敏感细胞会出现不稳定的情况，请及时和尊龙凯时联系，告知细胞的具体情况，以便尊龙凯时的技术人员跟踪回访直至问题解决。

7. 该细胞仅供科研使用。

8. 备注：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞。收到细胞后次传代建议1：2传代 。

9.注意： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿。不是1个T25瓶传2个10cm皿。

公司正在出售的产品：

大鼠谷酰胺(Gln)检测试剂盒 ，英文名： Gln ELISA Kit

Porcine ierferon alpha (IFN- alpha) ELISA Kit 猪α干扰素(IFN-α)检测试剂盒

出血性大肠杆菌(EHEC)核酸检测试剂盒(PCR-荧光探针法) 48T

CLIAKitforMIP-1Alpha/CCL3(HumanMacrophageInflammatoryProtein-1Alpha)ELISAkit人巨噬细胞性蛋白1α

体液科萨基病毒B(CoxsackievirusB)定性检测试剂盒20次

ELISAKit2,3-DPG犬2,3-二0酸甘油酸

IFNGR2重组小鼠 IFNGR2 蛋白 Protein

ABCD-1/CCL22 嗜酸粒细胞趋化蛋白22抗原 0.2mgABCD-1/CCL22 嗜酸粒细胞趋化蛋白22抗原

BPIFA2重组人 BPIFA2 / C20orf70 蛋白 (Fc 标签) Protein

CD19 Protein Human 重组人 CD19 / Leu-12 蛋白

TIMP1 Protein Rat 重组大鼠 TIMP-1 / TIMP1 蛋白

ABCD-1/CCL22 嗜酸粒细胞趋化蛋白22抗原 0.2mgABCD-1/CCL22 嗜酸粒细胞趋化蛋白22抗原

CD19 Protein Human 重组人 CD19 / Leu-12 蛋白

IFNGR2重组小鼠 IFNGR2 蛋白 Protein

TIMP1 Protein Rat 重组大鼠 TIMP-1 / TIMP1 蛋白

BPIFA2重组人 BPIFA2 / C20orf70 蛋白 (Fc 标签) Protein

小鼠胰岛素样生长因子2(IGF-2)ELISA 试剂盒 96T/48T

Rat monocyte chemotactic protein 4 (MCP-4/CCL13) ELISA Kit 大鼠单核细胞趋化蛋白4(MCP-4/CCL13)检测试剂盒

HumanGasicMucin,GMELISAKit 人胃粘液素(GM)检测试剂盒 96T/48T 进口分装

CLIAKitfor2,3-DPG(Human2,3-Disphosphoglycerate,2)ELISAKit人2,3-二0酸甘油酸

饮料环(cyclamate)含量薄层色谱法定性检测试剂盒20次

Mouselipoproteinα,Lp-αELISAKit小鼠脂蛋白α(Lp-α)检测试剂盒规格：96T/48T

大鼠胚胎肝母细胞小鼠组织因子途径抑制物(TFPI)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

小鼠水通道蛋白5(AQP-5)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

小鼠水通道蛋白4(AQP-4)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

小鼠水通道蛋白3(AQP-3)ELISAKit   ELISA.   96T/48T