实验报告：

一、分离与培养：

1、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次，将组织剪成1mm3左右大小；

2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶），混悬10s，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；

3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次，直至组织被消化；

4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养；

5、差速贴壁1h后，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养；二、免疫荧光鉴定：

1、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min；

2、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min；

4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；

5、PBS冲洗细胞3次，每次10min，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h；

6、用PBS冲洗3次，每次10min，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。

细胞简介：

大鼠乳腺成纤维分离自乳腺组织；乳腺位于皮下浅筋膜的浅层与深层之间，浅筋膜伸向乳腺组织内形成条索状的小叶间隔，一端连于胸肌筋膜，另一端连于皮肤，将乳腺腺体固定在胸部的皮下组织之中。乳腺是哺乳动物少数可以重复经历生长、功能分化和退化过程的器官之一。纤维结缔组织伸入乳腺组织之间，形成许多间隔，这些纤维结缔组织对乳房起固定作用，而纤维结缔组织是由成纤维细胞构成的。成纤维细胞（Fibroblast）是疏松结缔组织的主要细胞成分，由胚胎时期的间充质细胞分化而来。成纤维细胞较大，轮廓清楚，多为突起的纺锤形或星形的扁平状结构，其细胞核呈规则的卵圆形，核仁大而明显。成纤维细胞功能活动旺盛，细胞质嗜弱碱性，具明显的蛋白质合成和分泌活动，在一定条件下，它可以实现跟纤维细胞的互相转化；成纤维细胞对不同程度的细胞变性、坏死和组织缺损的修复有着十分重要的作用。刚分离的乳腺成纤维细胞呈圆形、折光性良好，悬浮于培养基中。30min细胞贴壁，其中部分开始伸出伪足，表现为小的突起；6h后细胞基本贴壁，伸展成梭形，胞核清晰，分布较均匀，散在生长，不聚集成团；细胞生长迅速，5-7天即呈融合状态，细胞排列紧密，有的交叉重叠生长，平坦、胞体较大，细胞质透明，细胞核较大，呈椭圆形，颜色淡。细胞融合，并彼此连接成网状；细胞呈突起的纺锤形或星形的扁平分布。

方法简介：

公司实验室分离的大鼠乳腺成纤维采用-胶原酶混合消化法结合差速贴壁法制备而来，细胞总量约为5×10?cells/瓶。

质量检测

公司实验室分离的大鼠乳腺成纤维经Vimentin免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

培养信息：

培养基 含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等

换液频率 每2-3天换液一次

生长特性 贴壁

细胞形态 成纤维细胞样

传代特性 可传5代左右；3代以内状态佳

消化液 0.25%

培养条件 气相：空气，95%；CO2，5%

注意事项：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象，若有上述现象发生请及时和尊龙凯时联系。

2. 仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息，如细胞形态、所用培养基、血清比例、所需细胞因子等，确保细胞培养条件一致，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题，责任由客户自行承担。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面，显微镜下观察细胞状态。因运输问题，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片，是正常现象。观察好细胞状态后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h。

4. 贴壁细胞可以消化，悬浮细胞直接混匀收集细胞，900 rpm-1000 rpm离心3 min，弃上清。加5 mL PBS重悬细胞，再900 rpm-1000 rpm离心3 min，，用新鲜的*培养基重悬细胞，并接种到新的培养瓶或培养皿中，置于培养箱中进行培养。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片，记录细胞状态，便于和我司技术部沟通交流。由于运输的原因，个别敏感细胞会出现不稳定的情况，请及时和尊龙凯时联系，告知细胞的具体情况，以便尊龙凯时的技术人员跟踪回访直至问题解决。

7. 该细胞仅供科研使用。

8. 备注：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞。收到细胞后次传代建议1：2传代 。

9.注意： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿。不是1个T25瓶传2个10cm皿。

公司正在出售的产品：

人转录激活因子4(ATF4)酶联免疫吸附测定试剂盒   Human ATF4 (Activating anscription Factor 4) ELISA Kit

人转录激活因子6(ATF6)酶联免疫吸附测定试剂盒   Human ATF6 (Activating anscription Factor 6) ELISA Kit

人腺苷三0酸结合盒转运体G1(ABCG1)酶联免疫吸附测定试剂盒   Human ABCG1 (ATP Binding Cassette anspoer G1) ELISA Kit

人腺苷三0酸结合盒转运体A1(ABCA1)酶联免疫吸附测定试剂盒   Human ABCA1(ATP Binding Cassette anspoer A1) ELISA Kit

豚鼠甘油-3-0酸脱氢酶(GAPDH)试剂盒 ，英文名： GAPDH ELISA Kit

Human paraoxonase (PON) ELISA Kit 人酶(PON)试剂盒

RabbitProgesterone,PROGELISAKit 兔子孕激素/孕酮(PROG)试剂盒 96T/48T 进口分装

CLIAKitforBF(HumanfactorB)ELISAKit人B因子

细菌糖酵解溴百里酚蓝(BTB)试剂盒20次

rabbitiercellularadhesionmolecule2,ICAM-2ELISAKit兔子细胞间粘附分子2(ICAM-2/CD102)试剂盒规格：96T/48T

GB重组巨细胞病毒 HCMV Glycoprotein B / gB 蛋白 Protein

TM(Thrombomodulin 0.5mgTM(Thrombomodulin) 血栓调节蛋白多肽

PARP1重组人 PARP-1 / PARP 蛋白 Protein

IL3 Protein Human 重组人 IL3 / IL-3 蛋白

HAVCR1 Protein Human 重组人 KIM-1 / TIM1 / HAVCR1 蛋白

TM(Thrombomodulin 0.5mgTM(Thrombomodulin) 血栓调节蛋白多肽

IL3 Protein Human 重组人 IL3 / IL-3 蛋白

GB重组巨细胞病毒 HCMV Glycoprotein B / gB 蛋白 Protein

HAVCR1 Protein Human 重组人 KIM-1 / TIM1 / HAVCR1 蛋白

PARP1重组人 PARP-1 / PARP 蛋白 Protein

大鼠乳腺成纤维细胞兔子白三烯B4(LTB4)ELISA 试剂盒

Human vascular endothelial cell adhesion molecule 1 (VCAM-1/CD106) ELISA Kit 人血管内皮细胞粘附分子1(VCAM-1/CD106)试剂盒

Humanai-neuroblastoma-aibody,NB-AbELISAKit 人抗神经母细胞瘤抗体(NB-Ab)试剂盒 96T/48T 进口分装

HumanEsogeeceptor,ER试剂盒人雌激素受体(ER)试剂盒规格：96T/48T

组织SPRK1激酶活性定量试剂盒(A/B/C)20次

humanorosomucoid2,ORM2ELISAKit人类粘蛋白2(ORM2)试剂盒规格：96T/48T