实验报告：

一、分离与培养：

1、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次，将组织剪成1mm3左右大小；

2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶），混悬10s，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；

3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次，直至组织被消化；

4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养；

5、差速贴壁1h后，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养；二、免疫荧光鉴定：

1、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min；

2、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min；

4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；

5、PBS冲洗细胞3次，每次10min，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h；

6、用PBS冲洗3次，每次10min，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。

细胞简介：

大鼠牙龈上皮分离自牙龈组织；牙龈是附着在牙颈和牙槽突部分的粘膜组织，呈粉红色、有光泽、质坚韧。牙龈边缘称为龈缘，正常呈月芽形。龈缘与牙颈之间的小沟称龈沟。两邻牙之间的牙龈突起称龈乳突。也叫齿龈，通称牙床；是指包住齿颈的黏膜组织，粉红色，内有很多血管和神经。牙龈上皮长期被认为是抵御口腔中持续存在的细菌的被动免疫屏障，随着对牙周致病菌的不断认识，发现牙龈上皮不仅仅是抵御微生物的物理屏障，上皮细胞还可以分泌抗菌多肽，参与先天性免疫。牙龈上皮作为牙周组织的道屏障，在抵御牙周炎细菌入侵的过程中发挥了重要作用，建立正常牙龈上皮细胞体外培养体系，将为各种牙龈上皮相关的研究提供稳定的实验模型。

方法简介：

公司实验室分离的大鼠牙龈上皮采用-胶原酶混合消化法结合差速贴壁法，并通过上皮细胞专用培养基培养筛选制备而来，细胞总量约为5×10?cells/瓶。

质量检测

公司实验室分离的大鼠牙龈上皮经Cytokeratin-18免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

培养信息：

包被条件 鼠尾胶原Ⅰ（2-5μg/cm2）

培养基 含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等

换液频率 每2-3天换液一次

生长特性 贴壁

细胞形态 上皮细胞样

传代特性 可传1-2代

消化液 0.25%

培养条件 气相：空气，95%；CO2，5%

注意事项：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象，若有上述现象发生请及时和尊龙凯时联系。

2. 仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息，如细胞形态、所用培养基、血清比例、所需细胞因子等，确保细胞培养条件一致，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题，责任由客户自行承担。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面，显微镜下观察细胞状态。因运输问题，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片，是正常现象。观察好细胞状态后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h。

4. 贴壁细胞可以消化，悬浮细胞直接混匀收集细胞，900 rpm-1000 rpm离心3 min，弃上清。加5 mL PBS重悬细胞，再900 rpm-1000 rpm离心3 min，，用新鲜的*培养基重悬细胞，并接种到新的培养瓶或培养皿中，置于培养箱中进行培养。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片，记录细胞状态，便于和我司技术部沟通交流。由于运输的原因，个别敏感细胞会出现不稳定的情况，请及时和尊龙凯时联系，告知细胞的具体情况，以便尊龙凯时的技术人员跟踪回访直至问题解决。

7. 该细胞仅供科研使用。

8. 备注：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞。收到细胞后次传代建议1：2传代 。

9.注意： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿。不是1个T25瓶传2个10cm皿。

公司正在出售的产品：

大鼠纤溶酶原激活物抑制因子1(PAI1)检测试剂盒 ，英文名： PAI1 ELISA Kit

Pisum sativum agglinin (PSA) ELISA Kit 豌豆凝集素(PSA)检测试剂盒

MouseLeukoieneB4,LT-B4ELISAKit 小鼠白三烯B4(LTB4)检测试剂盒 96T/48T 进口分装

HSV-IIIgM单疱疹Ⅱ型病毒IgM(捕获法，一步法)

细胞IGF-1R激酶活性定量检测试剂盒(A/B/C)20次

ELISAKitALCAM大鼠白细胞活化黏附因子

LEFTY2重组人 Lefty2 / Lefty A 蛋白 (Fc 标签) Protein

血管性血友病因子(vWF)重组蛋白 Recombinant Von Willebrand Factor (vWF)

HA重组甲型流感 H5N1 (A/turkey/Turkey/1/2005) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 蛋白 Protein

CD74 Protein Human 重组人 CD74 蛋白

GAG-P24 Protein HIV 重组人类免疫缺陷病毒Ⅰ型 HIV-1 p24 蛋白 (group M, subtype B, strain 92418)

血管性血友病因子(vWF)重组蛋白 Recombinant Von Willebrand Factor (vWF)

CD74 Protein Human 重组人 CD74 蛋白

LEFTY2重组人 Lefty2 / Lefty A 蛋白 (Fc 标签) Protein

GAG-P24 Protein HIV 重组人类免疫缺陷病毒Ⅰ型 HIV-1 p24 蛋白 (group M, subtype B, strain 92418)

HA重组甲型流感 H5N1 (A/turkey/Turkey/1/2005) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 蛋白 Protein

小鼠信号转导分子(Smad1)ELISA 试剂盒 96T/48T

Rat hepatic lipase (HL) ELISA Kit 大鼠肝脂酶(HL)检测试剂盒

HumanAcidPhosphatase,ACPELISAKit 人酸性0酸酶(ACP)检测试剂盒 96T/48T 进口分装

Chickenai-EndomysialAibodyIgA,EMAIgA检测试剂盒鸡抗肌内膜抗体IgA(EMAIgA)检测试剂盒规格：96T/48T

载玻片细胞APC蛋白表达荧光显微镜检测试剂盒10/20次

MouseHistoneDeacetylase,HDELISAKit小鼠组织蛋白去乙酰化酶(HD)检测试剂盒规格：96T/48T

大鼠牙龈上皮细胞小鼠血清总补体(CH50)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

小鼠可溶性CD86(B7-2/sCD86)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

小鼠胰岛素(INS)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

小鼠低氧诱导因子1α(HIF-1α)ELISAKit   ELISA.   96T/48T