细胞简介：

大鼠真皮成纤维分离自真皮组织；真皮，位于表皮深层，向下与皮下组织相连，真皮结缔组织的胶原纤维和弹性纤维互相交织在一起，埋于基质内。其内分布着各种结缔组织细胞和大量的胶原纤维弹性纤维，使皮肤既有弹性，又有韧性。其由两层组成——乳头层与网状层。真皮的结构组成是胶原蛋白、弹性纤维以及基质。成纤维细胞（Fibroblast）是疏松结缔组织的主要细胞成分，由胚胎时期的间充质细胞分化而来。成纤维细胞较大，轮廓清楚，多为突起的纺锤形或星形的扁平状结构，其细胞核呈规则的卵圆形，核仁大而明显。成纤维细胞功能活动旺盛，细胞质嗜弱碱性，具明显的蛋白质合成和分泌活动，在一定条件下，它可以实现跟纤维细胞的互相转化；成纤维细胞对不同程度的细胞变性、坏死和组织缺损的修复有着十分重要的作用。刚分离的真皮成纤维细胞呈圆形、折光性良好，悬浮于培养基中。30min细胞贴壁，其中部分开始伸出伪足，表现为小的突起；6h后细胞基本贴壁，伸展成梭形，胞核清晰，分布较均匀，散在生长，不聚集成团；细胞生长迅速，5-7天即呈融合状态，细胞排列紧密，有的交叉重叠生长，平坦、胞体较大，细胞质透明，细胞核较大，呈椭圆形，颜色淡。细胞融合，并彼此连接成网状；细胞呈突起的纺锤形或星形的扁平分布。真皮成纤维细胞在生理条件下的主要功能包括：构造和维持组织的正常形态，合成和释放细胞外基质以及组织损伤后及时大量聚集修复损伤组织。

方法简介：

公司实验室分离的大鼠真皮成纤维采用先消化、后-胶原酶混合消化法结合差速贴壁法制备而来，细胞总量约为5×10?cells/瓶。

质量检测

公司实验室分离的大鼠真皮成纤维经Vimentin免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

培养信息：

培养基 含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等

换液频率 每2-3天换液一次

生长特性 贴壁

细胞形态 成纤维细胞样

传代特性 可传5代左右；3代以内状态佳

消化液 0.25%

培养条件 气相：空气，95%；CO2，5%

实验报告：

一、分离与培养：

1、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次，将组织剪成1mm3左右大小；

2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶），混悬10s，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；

3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次，直至组织被消化；

4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养；

5、差速贴壁1h后，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养；二、免疫荧光鉴定：

1、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min；

2、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min；

4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；

5、PBS冲洗细胞3次，每次10min，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h；

6、用PBS冲洗3次，每次10min，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。

公司正在出售的产品：

大鼠卵白蛋白(OVA)检测试剂盒 ，英文名： OVA ELISA Kit

Mouse insulin like growth factor binding protein 4 (IGFBP-4) ELISA Kit 小鼠胰岛素样生长因子结合蛋白4(IGFBP-4)检测试剂盒

RatHeatShockProteinglycoprotein96,HSPgp96ELISAKit 大鼠热休克蛋白糖蛋白96(HSPgp96)检测试剂盒 96T/48T 进口分装

CLIAKitforGDI(HumanGuaninenucleotidedissociationInhibitor)ELISAKit人鸟苷酸解离抑制因子

细胞元素比色法定量检测试剂盒20次

RatsecretoryimmunoglobulinA,sIgAELISAKit大鼠分泌型免疫球蛋白A(sIgA)检测试剂盒规格：96T/48T

SMPD1重组小鼠 SMPD1 / ASM 蛋白 Protein

白介素1α(IL1α)重组蛋白 Recombinant Interleukin 1 Alpha (IL1a)

CPNE1重组人 CPNE1 / Copine I / CPN1 蛋白 Protein

ERN1 Protein Human 重组人 ERN1 / IRE1 蛋白 (aa 465-977, His & GST 标签)

IFNAR1 Protein Cynomolgus 重组食蟹猴 IFNAR1 / IFNAR 蛋白 (Fc 标签)

APP695-770 (Amyloid protein precursor 0.5mgAPP695-770 (Amyloid protein precursor) 淀粉样肽前体蛋白(多肽抗原)

ERN1 Protein Human 重组人 ERN1 / IRE1 蛋白 (aa 465-977, His & GST 标签)

EFNB1重组小鼠 Ephrin-B1 / EFNB1 蛋白 Protein

CNTN3 Protein Rat 重组大鼠 Contactin 3 / CNTN3 蛋白

MS4A1重组人 CD20 / MS4A1 蛋白 (aa 213-297, His 标签) Protein

小鼠坏死因子相关凋亡诱导配体1(AIL-R1)ELISA 试剂盒 96T/48T

Human ai cardiolipin aibody IgG (ACA-IgG) ELISA Kit 人抗心0脂抗体IgG(ACA-IgG)检测试剂盒

HumanAdenosinediphosphate,ADPELISAKit 人二0酸腺苷(ADP)检测试剂盒 96T/48T 进口分装

CLIAKitforACA(Humanai-cenolandcenosomeaibody)ELISAKit人抗中性粒/中心体抗体

一步法平端PCR反应液50次

MouseOncostatin-M,OSMELISAKit小鼠抑瘤素M(OSM)检测试剂盒规格：96T/48T

大鼠真皮成纤维细胞小鼠白介素 -12 (mouse IL-12)   作用：   ELISA   规格：   96T   美国 Biosesource

小鼠白介素 -12(p40) (mouse IL-12 p40)   作用：   ELISA   规格：   96T   美国 R&D

小鼠白介素 -12(p70) (mouse IL-12 p70)   作用：   ELISA   规格：   96T   奥地利 Bender

小鼠白介素 -13(p70) (mouse IL-13)   作用：   ELISA   规格：   96T   美国 Biosesource

注意事项：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象，若有上述现象发生请及时和尊龙凯时联系。

2. 仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息，如细胞形态、所用培养基、血清比例、所需细胞因子等，确保细胞培养条件一致，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题，责任由客户自行承担。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面，显微镜下观察细胞状态。因运输问题，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片，是正常现象。观察好细胞状态后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h。

4. 贴壁细胞可以消化，悬浮细胞直接混匀收集细胞，900 rpm-1000 rpm离心3 min，弃上清。加5 mL PBS重悬细胞，再900 rpm-1000 rpm离心3 min，，用新鲜的*培养基重悬细胞，并接种到新的培养瓶或培养皿中，置于培养箱中进行培养。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片，记录细胞状态，便于和我司技术部沟通交流。由于运输的原因，个别敏感细胞会出现不稳定的情况，请及时和尊龙凯时联系，告知细胞的具体情况，以便尊龙凯时的技术人员跟踪回访直至问题解决。

7. 该细胞仅供科研使用。

8. 备注：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞。收到细胞后次传代建议1：2传代 。

9.注意： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿。不是1个T25瓶传2个10cm皿。