实验报告：

一、分离与培养：

1、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次，将组织剪成1mm3左右大小；

2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶），混悬10s，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；

3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次，直至组织被消化；

4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养；

5、差速贴壁1h后，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养；二、免疫荧光鉴定：

1、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min；

2、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min；

4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；

5、PBS冲洗细胞3次，每次10min，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h；

6、用PBS冲洗3次，每次10min，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。

细胞简介：

大鼠直肠平滑肌分离自直肠组织；直肠为大肠的未段，位于小骨盆内。上端平第3骶椎处接续乙状结肠，沿骶骨和尾骨的前面下行，穿过盆膈，下端以门而终。直肠上端的大小似结肠，其下端扩大成直肠壶腹，是粪便排出前的暂存部位，下端变细接管。直肠在盆腔内的位置与骶椎腹面关系密切，与骶椎有相同的曲度。直肠周围多脂肪、无纵带，位于膀胱和生殖器官的背侧。直肠平滑肌细胞原代分离培养3天后，可见细胞贴壁伸展，细胞形态大小不一，呈梭形、不规则形、三角形或扇形，核卵圆形、居中；2周后细胞汇合，多数细胞伸展呈长梭形，胞浆丰富，有分枝状突起，细胞平行排列成单层或部分区域多层重叠生长，高低起伏；细胞密度低时，常交织成网状；密度高时，则排列为旋涡状或栅栏状。传代后细胞生长较快，4-6天即可汇合，并保持上述形态学特征和生长特点。直肠的动脉血供主要是来自肠系膜下动脉的直肠上动脉，来自髂内动脉的直肠中动脉和来自髂内动脉的直肠下动脉。平滑肌收缩是胃肠蠕动中基本的运动方式；肠炎时由于平滑肌特殊肌动蛋白的增加导致了平滑肌层的增厚。平滑肌肌动蛋白可能影响收缩力的产生，这进一步证明了炎症时的肠平滑肌细胞具有可塑性。利用肠平滑肌细胞的培养，可以帮助了解收缩、增殖和胃肠道结缔组织对平滑肌细胞的反应。

方法简介：

公司实验室分离的大鼠直肠平滑肌采用-胶原酶联合消化法结合差速贴壁法制备而来，细胞总量约为5×10?cells/瓶。

质量检测

公司实验室分离的大鼠直肠平滑肌经α-SMA免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

培养信息：

培养基 含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等

换液频率 每2-3天换液一次

生长特性 贴壁

细胞形态 成纤维细胞样

传代特性 可传5代左右；3代以内状态佳

消化液 0.25%

培养条件 气相：空气，95%；CO2，5%

注意事项：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象，若有上述现象发生请及时和尊龙凯时联系。

2. 仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息，如细胞形态、所用培养基、血清比例、所需细胞因子等，确保细胞培养条件一致，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题，责任由客户自行承担。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面，显微镜下观察细胞状态。因运输问题，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片，是正常现象。观察好细胞状态后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h。

4. 贴壁细胞可以消化，悬浮细胞直接混匀收集细胞，900 rpm-1000 rpm离心3 min，弃上清。加5 mL PBS重悬细胞，再900 rpm-1000 rpm离心3 min，，用新鲜的*培养基重悬细胞，并接种到新的培养瓶或培养皿中，置于培养箱中进行培养。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片，记录细胞状态，便于和我司技术部沟通交流。由于运输的原因，个别敏感细胞会出现不稳定的情况，请及时和尊龙凯时联系，告知细胞的具体情况，以便尊龙凯时的技术人员跟踪回访直至问题解决。

7. 该细胞仅供科研使用。

8. 备注：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞。收到细胞后次传代建议1：2传代 。

9.注意： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿。不是1个T25瓶传2个10cm皿。

公司正在出售的产品：

大鼠Slit同源物3(Slit3)检测试剂盒 ，英文名： Slit3 ELISA Kit

Phenylalanine (LPA) ELISA Kit 人苯(LPA)检测试剂盒

ChickenInsulin-likegrowthfactors1,IGF-1ELISAKit 鸡胰岛素样生长因子1(IGF-1)检测试剂盒 96T/48T 进口分装

CLIAKitforCCB(Mousecalciumchannelblockers)ELISAKit小鼠钙通道阻滞剂

细菌DNA损伤彗星荧光检测试剂盒20次

RatAndrostenedione,ASDELISAKit大鼠雄烯二同(ASD)检测试剂盒规格：96T/48T

ACVR2B重组人 ACVR2B / ActivinR-IIB 蛋白 (Fc 标签) Protein

角蛋白5(KRT5)重组蛋白 Recombinant Keratin 5 (KRT5)

HEXB重组人 Hexosaminidase B / HEXB 蛋白 Protein

CD97 Protein Human 重组人 CD97 蛋白 (Fc 标签)

HA Protein H1N1 重组甲型流感 H1N1 (A/New York/1/1918) 血凝素HA1 (Hemagglutinin) 蛋白

角蛋白5(KRT5)重组蛋白 Recombinant Keratin 5 (KRT5)

CD97 Protein Human 重组人 CD97 蛋白 (Fc 标签)

ACVR2B重组人 ACVR2B / ActivinR-IIB 蛋白 (Fc 标签) Protein

HA Protein H1N1 重组甲型流感 H1N1 (A/New York/1/1918) 血凝素HA1 (Hemagglutinin) 蛋白

HEXB重组人 Hexosaminidase B / HEXB 蛋白 Protein

小鼠纤连蛋白(FN)ELISA 试剂盒 96T/48T

Rat osteoprotegerin ligand (OPGL) ELISA Kit 大鼠骨保护素配体(OPGL)检测试剂盒

Humandopaminedecarboxylase,DDCELISAKit 人多巴胺脱羧酶(DDC)检测试剂盒 96T/48T 进口分装

ChickenHeatShockProtein60,HSP-60检测试剂盒鸡热休克蛋白60(Hsp-60)检测试剂盒规格：96T/48T

载玻片细胞CDK2蛋白表达荧光显微镜检测试剂盒10/20次

MouseHeatShockProteinglycoprotein96,HSPgp96ELISAKit小鼠热休克蛋白糖蛋白96(HSPgp96)检测试剂盒规格：96T/48T

大鼠直肠平滑肌细胞小鼠血管紧张素Ⅱ   英文名称：   Angiotensin Ⅱ   规格：      英文缩写：   ANGⅡ

小鼠血管生成素-2   英文名称：   Angiopoietin-2   规格：      英文缩写：   ANG 2

小鼠心素   英文名称：   aialnaiureticpeptide   规格：      英文缩写：   ANP

小鼠凋亡诱导因子   英文名称：   apoptosis-inducing factor   规格：      英文缩写：   AIF