实验报告：

一、分离与培养：

1、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次，将组织剪成1mm3左右大小；

2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶），混悬10s，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；

3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次，直至组织被消化；

4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养；

5、差速贴壁1h后，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养；二、免疫荧光鉴定：

1、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min；

2、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min；

4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；

5、PBS冲洗细胞3次，每次10min，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h；

6、用PBS冲洗3次，每次10min，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。

细胞简介：

大鼠棕色脂肪干分离自棕色脂肪组织；动物体内存在棕色和白色两种脂肪，白色脂肪堆积在皮下，负责储存多余热量；棕色脂肪负责分解引发肥胖的白色脂肪，将后者转化成二氧化碳、水和热量，本身不储存热量。棕色脂肪组织呈棕色，其特点是组织中有丰富的毛细血管，脂肪细胞内散着许多小脂滴，线粒体大而丰富，核圆形，位于细胞中央，这种脂肪细胞也称为多泡脂肪细胞。棕色脂肪组织在成年动物极少，新生儿及冬眠动物较多，在新生儿主要分布在肩胛间区、腋窝及颈后部等处。棕色脂肪组织仅在婴儿时期发挥作用，它们堆积在新生儿肩胛处，帮助维持体温。随着年龄增长，棕色脂肪会逐渐消失。终，动物体内只残存少量棕色脂肪细胞，分布于颈部和锁骨。脂肪干细胞（ADSCs）是一种具有多向分化潜能的干细胞，主要恢复组织细胞的修复功能，促进细胞的再生，恢复年轻面容的同时，身体机能也得到充分改善，有效改善亚健康、早衰等疾病，由内而外真正的有效抵抗衰老。脂肪干细胞具有很多优点：①具有自我更新及多向分化的潜能；②来源充足；③对供区的创伤较小；④获得率及体外扩增速率高。脂肪干细胞是目前被广泛应用于组织工程领域中理想的种子细胞。

方法简介：

公司实验室分离的大鼠棕色脂肪干采用胶原酶消化法制备而来，细胞总量约为5×10?cells/瓶。

质量检测

公司实验室分离的大鼠棕色脂肪干经CD90免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

培养信息：

培养基 含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等

换液频率 每2-3天换液一次

生长特性 贴壁

细胞形态 成纤维细胞样

传代特性 可传5代左右；3代以内状态佳

消化液 0.25%

培养条件 气相：空气，95%；CO2，5%

注意事项：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象，若有上述现象发生请及时和尊龙凯时联系。

2. 仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息，如细胞形态、所用培养基、血清比例、所需细胞因子等，确保细胞培养条件一致，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题，责任由客户自行承担。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面，显微镜下观察细胞状态。因运输问题，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片，是正常现象。观察好细胞状态后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h。

4. 贴壁细胞可以消化，悬浮细胞直接混匀收集细胞，900 rpm-1000 rpm离心3 min，弃上清。加5 mL PBS重悬细胞，再900 rpm-1000 rpm离心3 min，，用新鲜的*培养基重悬细胞，并接种到新的培养瓶或培养皿中，置于培养箱中进行培养。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片，记录细胞状态，便于和我司技术部沟通交流。由于运输的原因，个别敏感细胞会出现不稳定的情况，请及时和尊龙凯时联系，告知细胞的具体情况，以便尊龙凯时的技术人员跟踪回访直至问题解决。

7. 该细胞仅供科研使用。

8. 备注：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞。收到细胞后次传代建议1：2传代 。

9.注意： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿。不是1个T25瓶传2个10cm皿。

公司正在出售的产品：

大鼠C-肽(C-Peptide)检测试剂盒 ，英文名： C-Peptide ELISA Kit

People two asymmeic dimethylarginine (ADMA) ELISA Kit 人不对称二甲基精(ADMA)检测试剂盒

DuckIerleukin2,IL-2ELISAkit 鸭白介素2(IL-2)检测试剂盒 96T/48T 进口分装

CLIAKitforCA125卵巢癌相关抗原

细菌蛋白胨铁琼脂平板50个

Rat1,3-βDglucosidase,1,3-βD-GluELISAKit大鼠1,3-βD葡葡糖苷酶(1,3-βD-Glu)检测试剂盒规格：96T/48T

MSR1重组小鼠 MSR1 / CD204 / SCARA1 蛋白 Protein

bFGF 碱性成纤维细胞生长因子(多肽抗原 0.5mgbFGF 碱性成纤维细胞生长因子(多肽抗原)

ALPI重组人 Alkaline Phosphatase / ALPI 蛋白 (Fc 标签) Protein

CDC42BPB Protein Human 重组人 CDC42BPB 蛋白 (His & GST 标签)

CD226 Protein Rat 重组大鼠 CD226 / DNAM-1 蛋白 (Fc 标签)

bFGF 碱性成纤维细胞生长因子(多肽抗原 0.5mgbFGF 碱性成纤维细胞生长因子(多肽抗原)

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MSR1重组小鼠 MSR1 / CD204 / SCARA1 蛋白 Protein

CD226 Protein Rat 重组大鼠 CD226 / DNAM-1 蛋白 (Fc 标签)

ALPI重组人 Alkaline Phosphatase / ALPI 蛋白 (Fc 标签) Protein

小鼠细胞周期素D3(Cyclin-D3)ELISA 试剂盒 96T/48T

Rat bone morphogenetic protein receptor 1A (BMPR-1A) ELISA Kit 大鼠骨成型蛋白受体1A(BMPR-1A)检测试剂盒

Humayrosinehydroxylase,THELISAKit 人酪羟化酶(TH)检测试剂盒 96T/48T 进口分装

ChickenHyaluronicacid,HA检测试剂盒鸡透明质酸(HA)检测试剂盒规格：96T/48T

载玻片细胞COLLAGENII蛋白表达荧光显微镜检测试剂盒10/20次

MouseHeatShockProtein40,Hsp-40ELISAKit小鼠热休克蛋白40(Hsp-40)检测试剂盒规格：96T/48T

大鼠棕色脂肪干细胞小鼠雄烯二(ASD)检测试剂盒   96T/48T   试剂盒   组装/原装

小鼠雄激素(androgen)检测试剂盒   96T/48T   试剂盒   组装/原装

小鼠性激素结合球蛋白(SHBG)检测试剂盒   96T/48T   试剂盒   组装/原装

小鼠信号转导分子7(Smad7)检测试剂盒   96T/48T   试剂盒   组装/原装