① 组织块培养法

组织块培养是常用、简便易行和成功率较高的原代培养方法。其基本方法是将剪成的小组织团块接种于培养瓶(或皿)中，瓶壁可预先涂以胶原薄层，以利于组织块粘着于瓶壁，使周边细胞能沿瓶壁向外生长。

② 消化培养法

③ 悬浮细胞培养法

对于悬浮生长的细胞，如白血病细胞、淋巴细胞、骨髓细胞、胸水和腹水中的癌细胞和免疫细胞无需消化，可采用低速离心分离，直接培养，或经淋巴细胞分层液分离后接种培养。

④器官培养

器官培养是指从供体取得器官或组织块后，不进行组织分离而直接在体外的特定环境条件下培养，器官培养可保持器官组织的相对完整性，可用于重点观察细胞间的联系、排列情况和相互影响，以及局部环境的生物调节作用。

产品名称：人外周血树突状细胞(成熟DC细胞)

英文名称：Human Peripheral Blood Maturation Dendritic Cells

组织来源：外周血

产品规格：5×105cells/T25细胞培养瓶

人外周血DC分离自外周血，由外周血单核细胞诱导而成的；外周血是除骨髓之外的血液，临床上常用一些方法把骨髓中的造血干细胞释放到血液中，再在从血液中提取分离得到造血干细胞，尊龙凯时把这样得到的干细胞称为外周血干细胞，在二十一世纪初人类开始的生命方舟计划中提出外周血这一新概念。树突状细胞分为成熟树突状细胞和未成熟树突状细胞，典型的未成熟树突状细胞呈半贴壁生长，在GM-CSF、IL4的作用下形成葡萄串样集落，细胞大而形态不规则，表面皱褶多，亦可见少量短刺状突，胞内细胞器丰富并可见吞噬泡，具有较强的迁移能力，伴随有部分未诱导成的单核细胞，贴壁形态多样。而成熟的树突状细胞由未成熟DC进一步经TNFα、LPS等诱导而成，多数呈悬浮生长， 细胞呈圆形，细胞体积进一步增大，表面大量粗细不等的树枝样突起(高倍镜或者电镜下可观察到 )，伴随少量贴壁未成熟细胞或者单核细胞。未成熟DC细胞长时间培养也可能导致自发分化成熟。DC细胞尚无特异性细胞表面分子标志，主要通过形态学、组合性细胞表面标志、在混合淋巴细胞反应中能激活初始T细胞等特征进行鉴定。其中成熟树突状细胞表面高表达主要组织相容性复合物(MHC)以及CD80、CD86等共刺激分子，进而激活T淋巴细胞，诱导免疫应答，处于启动、调控、并维持免疫应答的中心环节；未成熟树突状细胞具有很强的抗原摄取加工能力，但由于缺乏多种共刺激分子不能使初始T细胞活化、增殖产生免疫应答，不能激活T细胞的信号，可导致T细胞无能，从而诱导免疫低反应或抗原免疫特异性耐受。未成熟树突状细胞表面CD80、CD86、MHC-Ⅱ类分子等共刺激分子表达较低，一般在30%以下。

实验室分离的人外周血成熟DC采用密度梯度离心法分离外周血单个核细胞、培养过程添加细胞因子诱导而来，细胞总量约为5×10⁵cells/瓶。

质量检测

实验室分离的人外周血树突状(成熟DC细胞)经CD86免疫荧光鉴定、细 胞 形态等综合鉴定，纯度可达80%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

培养基：含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等

换液频率：每2-3天换液一次

生长特性：半贴壁半悬浮

细胞形态：圆形，树突状

传代特性：属于高度分化细胞；属于不增殖细胞群

消化液：0.25%

培养条件：气相：空气，95%；CO2，5%

人外周血树突状(成熟DC细胞)体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的佳培养状态。

取材→分离→培养和维持

1、取材

人和动物细胞的取材是原代细胞培养成功的首要条件，直接影响细胞的体外培养。

(1) 取材的基本要求

① 取材要注意新鲜和保鲜

② 应严格无菌

③ 防止机械损伤

④ 去除无用组织和避免干燥

⑤ 应注意组织类型、分化程度、年龄等

⑥ 作好记录

2、分离

人或动物体内(或胚胎组织)由于多种细胞结合紧密，不利于各个细胞在体外培养中生长繁殖，必须将现有的组织块充分散开，使细胞解离出来。

(1)悬浮细胞的分离方法

组织材料若来自血液、羊水、胸水或腹水的悬液材料，的方法是采用1000r/min的低速离心10分钟。经离心后由于各种细胞的比重不同可在分层液中形成不同层，这样可根据需要收获目的细胞。

(2)实体组织材料的分离方法

对于实体组织材料，由于细胞间结合紧密，为了使组织中的细胞充分分散，形成细胞悬液，可采用机械分散法(物理裂解)和消化分离法。

① 机械分散法

特点:简便、快速,但对组织机械损伤大，而且细胞分散效果差,适用于处理纤维成分少的软组织。

② 消化分离法

组织消化法是把组织剪切成较小团块(或糊状)，应用酶的生化作用和非酶的化学作用进一步使细胞间的桥连结构松动，使团块膨松，由块状变成絮状，此时再采用机械法，用吸管吹打分散或电磁搅拌或在摇珠瓶中振荡，使细胞团块得以较充分的分散，制成少量细胞群团和大量单个细胞的细胞悬液，接种培养后，细胞容易贴壁生长。

猪透明质酸(HA)ELISA 试剂盒

Human tissue inhibitors of metalloproteinase 2 (TIMP-2) ELISA Kit 人基质金属蛋白酶抑制因子2(TIMP-2)检测试剂盒

GuineaPigSuperOxidaseDimase,SODELISAKit 豚鼠超氧化物歧化酶(SOD)检测试剂盒 96T/48T 进口分装

CLIAKitforANG-R-Tie1ELISAKit大鼠血管生成素受体Tie1

血液超氧化物阴离子化学发光法定量检测试剂盒20次

PorcineFollicle-stimulatinghormone,FSHELISAKit猪促卵泡素(FSH)检测试剂盒规格：96T/48T

IL20RA重组狗 IL20RA / IL-20RA 蛋白 (Fc 标签) Protein

MYOZ/MYOZ1(Myozenin 0.5mgMYOZ/MYOZ1(Myozenin)human、ret、mouse MYOZ抗原

COL2A1重组人 COL2A1 蛋白 (aa 1242-1487, His 标签) Protein

KCNIP3 Protein Human 重组人 CSEN / Calsenilin / KCNIP3 蛋白

MAP2K1 Protein Mouse 重组小鼠 MEK1 / MAP2K1 / MKK1 蛋白

MYOZ/MYOZ1(Myozenin 0.5mgMYOZ/MYOZ1(Myozenin)human、ret、mouse MYOZ抗原

KCNIP3 Protein Human 重组人 CSEN / Calsenilin / KCNIP3 蛋白

IL20RA重组狗 IL20RA / IL-20RA 蛋白 (Fc 标签) Protein

MAP2K1 Protein Mouse 重组小鼠 MEK1 / MAP2K1 / MKK1 蛋白

COL2A1重组人 COL2A1 蛋白 (aa 1242-1487, His 标签) Protein

豚鼠γ干扰素(IFN-γ)检测试剂盒 ，英文名： IFN-γ ELISA Kit

Human mast cell yptase (MCT) ELISA Kit 人肥大细胞类(MCT)检测试剂盒

rabbitThyroidStimulatingHormone,TSHELISAKit 兔子促甲状腺素(TSH)检测试剂盒 96T/48T 进口分装

CLIAKitforBeta2-GP1AbIgG(HumanBeta2-Glycoprotein1AibodyIgG)ELISAKit人β2糖蛋白1抗体IgG

细菌脂肪酶(LIPASE)活性比色法定量检测试剂盒20次

RabbitEndothelialniicoxidesyhase,eNOSELISAKit兔内皮型合成酶(eNOS)检测试剂盒规格：96T/48T

人外周血树突状细胞(成熟DC细胞)人原钙黏素1(PCDH1)酶联免疫吸附测定试剂盒   Human PCDH1 (Protocadherin 1) ELISA Kit

人原钙黏素β2(PCDHβ2)酶联免疫吸附测定试剂盒   Human PCDHβ2 (Protocadherin Beta 2) ELISA Kit

人原纤蛋白1(FBN1)酶联免疫吸附测定试剂盒   Human FBN1 (Fibrillin 1) ELISA Kit

人原纤蛋白2(FBN2)酶联免疫吸附测定试剂盒   Human FBN2 (Fibrillin 2) ELISA Kit

视天气状况和运输距离远近,公司与客户协商后选择下述方式中的一种进行。

1)1mL冻存细胞悬液装于1.8ml的冻存管中,置于装满干冰的泡沫保温盒中进行运输;收到细胞后请尽快解冻复苏细胞进行培养,如无法立刻进行复苏操作,冻存细胞可在-80℃的条件下保存1个月。

T-25培养瓶充满培养基后进行常温运输;收到细胞后请镜下观察细胞生长状态,如铺瓶率超过85%请立即进行传代操作,如悬浮的细胞较多,请将培养瓶至于培养箱中静置过夜以帮助未死亡的悬浮细胞能够再次贴壁。本公司的所有产品仅用于科学研究或者工业科研等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用