细胞简介：

兔肠成纤维分离自肠道组织；肠道指的是从胃幽门至门的消化管。肠是消化管中长的一段，也是功能重要的一段。哺乳动物的肠包括小肠、大肠和直肠3大段。大量的消化作用和几乎全部消化产物的吸收都是在小肠内进行的，大肠主要浓缩食物残渣，形成粪便，再通过直肠经门排出体外。肠道堪称身体劳累的器官——每天不停地消化、吸收食物，以提供足够的养分，其实它的功能还远不止此——它还是机体内大的微生态系统。各种哺乳动物肠的结构和功能基本相似。肠壁结构一般分4层，由外向内依次为：浆膜层（腹腔脏层），平滑肌层，黏膜下层和黏膜层。平滑肌层的外层为纵行肌纤维，内层为环形肌纤维，两者都以螺旋式走行，它们以收缩和舒张来完成肠的机械性消化。黏膜层又分为3层：靠近黏膜下层的是一层平滑肌，称为黏膜肌层。其次为结缔组织，又称为固有层。后面向肠腔的是一层柱状上皮细胞构成的黏膜。成纤维细胞（Fibroblast）是疏松结缔组织的主要细胞成分，由胚胎时期的间充质细胞分化而来。成纤维细胞较大，轮廓清楚，多为突起的纺锤形或星形的扁平状结构，其细胞核呈规则的卵圆形，核仁大而明显。成纤维细胞功能活动旺盛，细胞质嗜弱碱性，具明显的蛋白质合成和分泌活动，在一定条件下，它可以实现跟纤维细胞的互相转化；成纤维细胞对不同程度的细胞变性、坏死和组织缺损的修复有着十分重要的作用。

方法简介：

实验室分离的兔肠成纤维采用胶原酶-联合消化法结合差速贴壁法制备而来，细胞总量约为5×10⁵cells/瓶。

质量检测

实验室分离的兔肠成纤维经Vimentin免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

培养信息：

培养基：含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等

换液频率：每2-3天换液一次

生长特性：贴壁

细胞形态：成纤维细胞样

传代特性：可传2-3代

消化液：0.25%

培养条件：气相：空气，95%；CO2，5%

兔肠成纤维体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的佳培养状态。

实验报告：

一、分离与培养：

1、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次，将组织剪成1mm3左右大小；

2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶），混悬10s，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；

3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次，直至组织被消化；

4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养；

5、差速贴壁1h后，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养；二、免疫荧光鉴定：

1、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min；

2、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min；

4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；

5、PBS冲洗细胞3次，每次10min，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h；

6、用PBS冲洗3次，每次10min，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。

公司正在出售的产品：

大鼠聚集蛋白聚糖(AGC)检测试剂盒 ，英文名： AGC ELISA Kit

Monkey Vascuoar endothelial cell growth factor receptor -3 (VEGFR-3) ELISA Kit血管内皮细胞生长因子受体-3(VEGFR-3)检测试剂盒

RatterminalcomplemecomplexC5b-9,TCCC5b-9ELISAKit 大鼠末端补体复合物C5b-9(TCCC5b-9)检测试剂盒 96T/48T 进口分装

CLIAKitforFree-T3ELISAKit大鼠游离三甲状腺原

细胞活力蓝色荧光检测试剂盒50次

RatPhosphotylinosital3kinase,PI3KELISAKit大鼠0酸肌醇3激酶(PI3K)检测试剂盒规格：96T/48T

APOA1重组小鼠 ApoA1 蛋白 Protein

蛋白二硫键异构酶(PDI)重组蛋白 Recombinant Protein Disulfide Isomerase (PDI)

RPRD1B重组人 RPRD1B 蛋白 Protein

IFNL1 Protein Human 重组人 IL-29 / Interleukin-29 蛋白

SELL Protein Cynomolgus 重组食蟹猴 CD62L / L-Selectin / SELL 蛋白

AATK peptide 细胞凋亡关联酪激酶抗原 0.5mgAATK peptide 细胞凋亡关联酪激酶抗原

IFNL1 Protein Human 重组人 IL-29 / Interleukin-29 蛋白

OMG重组小鼠 OMGP / OMG 蛋白 (aa 1-245, His 标签) Protein

COLEC12 Protein Rat 重组大鼠 CLP1 / COLEC12 蛋白

CXCL10重组人 CXCL10 / Crg-2 蛋白 Protein

豌豆凝集素(PSA)ELISA 试剂盒 96T/48T

Rat cardiac anscription factor GATA4 大鼠心肌转录因子GATA4

Humanai-insulieceptoraibody,AIRAELISAKit 人抗胰岛素受体抗体(AIRA)检测试剂盒 96T/48T 进口分装

HumanCreatineKinaseMBisoenzyme,CK-MB检测试剂盒人肌酸激酶同工酶MB(CK-MB)检测试剂盒规格：96T/48T

组织C-TAK激酶活性定量检测试剂盒(A/B/C)20次

HumanProstaticAcidPhosphatase，PAPELISAKit人前列腺酸性0酸酶(PAP)检测试剂盒规格：96T/48T

兔肠成纤维细胞肽酶抑制因子3   英文名称：   Human Peptidase Inhibitor 3   规格：      英文缩写：   PI-3

过氧化物酶体增殖物活化受体γ   英文名称：   Human Peroxisome Proliferators Activated Receptor γ   规格：      英文缩写：   PPARγ

0酸化SMAD2/3抗体   英文名称：   Human Phosphor Mothers Against Decapeaplegic Homolog 2/3 aibody   规格：      英文缩写：   PSMAD2/3 Ab

0酸化核因子κB   英文名称：   Human phosphor-Nuclear Factor kappa B   规格：      英文缩写：   pNFκB

注意事项：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象，若有上述现象发生请及时和尊龙凯时联系。

2. 仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息，如细胞形态、所用培养基、血清比例、所需细胞因子等，确保细胞培养条件一致，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题，责任由客户自行承担。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面，显微镜下观察细胞状态。因运输问题，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片，是正常现象。观察好细胞状态后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h。

4. 贴壁细胞可以消化，悬浮细胞直接混匀收集细胞，900 rpm-1000 rpm离心3 min，弃上清。加5 mL PBS重悬细胞，再900 rpm-1000 rpm离心3 min，，用新鲜的*培养基重悬细胞，并接种到新的培养瓶或培养皿中，置于培养箱中进行培养。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片，记录细胞状态，便于和我司技术部沟通交流。由于运输的原因，个别敏感细胞会出现不稳定的情况，请及时和尊龙凯时联系，告知细胞的具体情况，以便尊龙凯时的技术人员跟踪回访直至问题解决。

7. 该细胞仅供科研使用。

8. 备注：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞。收到细胞后次传代建议1：2传代 。

9.注意： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿。不是1个T25瓶传2个10cm皿。