① 组织块培养法

组织块培养是常用、简便易行和成功率较高的原代培养方法。其基本方法是将剪成的小组织团块接种于培养瓶(或皿)中，瓶壁可预先涂以胶原薄层，以利于组织块粘着于瓶壁，使周边细胞能沿瓶壁向外生长。

② 消化培养法

③ 悬浮细胞培养法

对于悬浮生长的细胞，如白血病细胞、淋巴细胞、骨髓细胞、胸水和腹水中的癌细胞和免疫细胞无需消化，可采用低速离心分离，直接培养，或经淋巴细胞分层液分离后接种培养。

④器官培养

器官培养是指从供体取得器官或组织块后，不进行组织分离而直接在体外的特定环境条件下培养，器官培养可保持器官组织的相对完整性，可用于重点观察细胞间的联系、排列情况和相互影响，以及局部环境的生物调节作用。

产品名称：兔脑微血管内皮细胞

英文名称：Rabbit Brain Microvascular Endothelial Cells

组织来源：脑

产品规格：5×105cells/T25细胞培养瓶

兔脑微血管内皮分离自脑组织；脑微血管内皮细胞是血脑屏障的主要组成成分，它是组成脑微血管腔面单层扁平上皮样细胞，能够限制可溶性物质和细胞等从血液进入大脑，大脑微血管内皮细胞与外周内皮细胞相比具有一些相同特性。它所产生和分泌的生物活性物质对维持血管张力、调节血压、抗血栓形成等有重要作用，在脑血管疾病的发病机制中有重要病理生理学意义。与外周内皮细胞相同，大脑微血管内皮细胞表面表达细胞粘附分子，调控白细胞进入大脑。由于微血管内皮细胞的器官特异性，内皮细胞通常取源于疾病研究的相关组织。其主要特征如下：①脑微血管内皮细胞存在许多细胞间紧密连接，产生很高的跨内皮阻抗，延迟细胞旁的通量；②脑微血管内皮细胞缺乏内皮细胞的窗孔结构，其液相物质胞饮水平较低；③脑微血管内皮细胞具有不对称定位酶和载体介导转运系统，从而产生“两极分化"的表现型。

实验室分离的兔脑微血管内皮采用胶原酶-混合消化法结合密度梯度离心法、后通过内皮细胞专用培养基培养筛选制备而来，细胞总量约为5×10⁵cells/瓶。

质量检测

实验室分离的兔脑微血管内皮经CD31免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

包被条件：PLL（0.1mg/ml），明胶（0.1%）

培养基：含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等

换液频率：每2-3天换液一次

生长特性：贴壁

细胞形态：内皮细胞样

传代特性：可传2-3代

消化液：0.25%

培养条件：气相：空气，95%；CO2，5%

兔脑微血管内皮体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的佳培养状态。

取材→分离→培养和维持

1、取材

人和动物细胞的取材是原代细胞培养成功的首要条件，直接影响细胞的体外培养。

(1) 取材的基本要求

① 取材要注意新鲜和保鲜

② 应严格无菌

③ 防止机械损伤

④ 去除无用组织和避免干燥

⑤ 应注意组织类型、分化程度、年龄等

⑥ 作好记录

2、分离

人或动物体内(或胚胎组织)由于多种细胞结合紧密，不利于各个细胞在体外培养中生长繁殖，必须将现有的组织块充分散开，使细胞解离出来。

(1)悬浮细胞的分离方法

组织材料若来自血液、羊水、胸水或腹水的悬液材料，的方法是采用1000r/min的低速离心10分钟。经离心后由于各种细胞的比重不同可在分层液中形成不同层，这样可根据需要收获目的细胞。

(2)实体组织材料的分离方法

对于实体组织材料，由于细胞间结合紧密，为了使组织中的细胞充分分散，形成细胞悬液，可采用机械分散法(物理裂解)和消化分离法。

① 机械分散法

特点:简便、快速,但对组织机械损伤大，而且细胞分散效果差,适用于处理纤维成分少的软组织。

② 消化分离法

组织消化法是把组织剪切成较小团块(或糊状)，应用酶的生化作用和非酶的化学作用进一步使细胞间的桥连结构松动，使团块膨松，由块状变成絮状，此时再采用机械法，用吸管吹打分散或电磁搅拌或在摇珠瓶中振荡，使细胞团块得以较充分的分散，制成少量细胞群团和大量单个细胞的细胞悬液，接种培养后，细胞容易贴壁生长。

山羊免疫球蛋白A   英文名称：   Immunoglobulin A   规格：      英文缩写：   IgA

山羊   英文名称：   Coisol   规格：      英文缩写：   CO

山羊β   英文名称：   β-Hydroxybyrate   规格：      英文缩写：   Β-OHB

山羊胰岛素   英文名称：   lnsulin   规格：      英文缩写：   INS

豚鼠前列腺素E2(PGE2)试剂盒 ，英文名： PGE2 ELISA Kit

Human cytokeratin low molecular weight (CK-LMW) ELISA Kit 人低分子量细胞角蛋白(CK-LMW)试剂盒

Monkeybrainnaiureticpeptide,BNPELISAKit脑素/脑尿肽(BNP)试剂盒 96T/48T 进口分装

CLIAKitforBKELISAKit大鼠血管舒缓激肽

细菌尿肉汤500毫升

Rabbitleoopichormone,LHELISAKit兔子促黄体激素(LH)试剂盒规格：96T/48T

HA重组甲型流感 H6N4 (A/chicken/HongKong/17/77) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 蛋白 Protein

PMP2/FABP8(peripheral myelin protein 2 0.5mgPMP2/FABP8(peripheral myelin protein 2) 周围神经髓鞘蛋白2抗原

SERPINE1重组人 SerpinE1 / PAI-1 蛋白 Protein

IL17A Protein Human 重组人 IL17 / IL17A 蛋白

FCGR2A Protein Human 重组人 CD32a / FCGR2A 蛋白 (167 Arg, His 标签)

PMP2/FABP8(peripheral myelin protein 2 0.5mgPMP2/FABP8(peripheral myelin protein 2) 周围神经髓鞘蛋白2抗原

IL17A Protein Human 重组人 IL17 / IL17A 蛋白

HA重组甲型流感 H6N4 (A/chicken/HongKong/17/77) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 蛋白 Protein

FCGR2A Protein Human 重组人 CD32a / FCGR2A 蛋白 (167 Arg, His 标签)

SERPINE1重组人 SerpinE1 / PAI-1 蛋白 Protein

兔脑微血管内皮细胞大鼠可溶性CD80(sCD80/B7-1)试剂盒 ，英文名： sCD80/B7-1 ELISA Kit

Mice colorectal cancer aigen (CCA) ELISA Kit 小鼠结肠癌抗原(CCA)试剂盒

MouseCathepsinK,cath-KELISAKit 小鼠组织蛋白酶K(cath-K)试剂盒 96T/48T 进口分装

CLIAKitforHumanparathyroidhormone-likeprotein,PLPELISAKit人甲状旁腺激素样蛋白

同位素RNA北方杂交试剂盒5次

ELISAKitPL-A2大鼠0脂酶A2

视天气状况和运输距离远近,公司与客户协商后选择下述方式中的一种进行。

1)1mL冻存细胞悬液装于1.8ml的冻存管中,置于装满干冰的泡沫保温盒中进行运输;收到细胞后请尽快解冻复苏细胞进行培养,如无法立刻进行复苏操作,冻存细胞可在-80℃的条件下保存1个月。

T-25培养瓶充满培养基后进行常温运输;收到细胞后请镜下观察细胞生长状态,如铺瓶率超过85%请立即进行传代操作,如悬浮的细胞较多,请将培养瓶至于培养箱中静置过夜以帮助未死亡的悬浮细胞能够再次贴壁。本公司的所有产品仅用于科学研究或者工业科研等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用