细胞简介：

兔小梁网分离自眼球组织；小梁网由角膜基质纤维、后界膜和角膜内皮向后扩展而成，覆盖在巩膜静脉窦的内侧。小梁网细胞在眼内压调节中起着关键作用；小梁网细胞内有特定的神经递质和神经肽受体，其中包括肾上腺素、乙酰和神经肽Y。青光眼是由于眼内压力升高而造成的一种不可逆致盲眼病，小梁网细胞的体外培养是青光眼病因学研究的重要手段之一。在小梁网细胞中，一长串的血管活性多肽和生长因子能够触发细胞内信号传导机制，小梁网细胞可合成不同类型的细胞外基质蛋白以及金属蛋白酶。形态学观察可见，刚从组织块长出的原代细胞，形态各异，多数呈星状或不规则形。细胞有胞突，核椭圆形，胞体肥大，胞浆丰富，且可见吞噬颗粒。随着细胞的增生及相互融合为单层，细胞的形态趋于一致。胞浆的色素颗粒及胞突消失，排列紧密呈类似上皮细胞的扁椭圆形或不规则形。胞体透亮，包膜清晰。

方法简介：

实验室分离的兔小梁网采用组织贴块法制备而来，细胞总量约为5×10⁵cells/瓶。

质量检测

实验室分离的兔小梁网经NSE(神经元特异性烯醇化酶)免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

培养信息：

培养基：含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等

换液频率：每2-3天换液一次

生长特性：贴壁

细胞形态：梭形、多角形

传代特性：可传2-3代

消化液：0.25%

培养条件：气相：空气，95%；CO2，5%

兔小梁网体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的佳培养状态。

实验报告：

一、分离与培养：

1、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次，将组织剪成1mm3左右大小；

2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶），混悬10s，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；

3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次，直至组织被消化；

4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养；

5、差速贴壁1h后，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养；二、免疫荧光鉴定：

1、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min；

2、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min；

4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；

5、PBS冲洗细胞3次，每次10min，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h；

6、用PBS冲洗3次，每次10min，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。

公司正在出售的产品：

小鼠氧还原蛋白过氧化物酶4(PRDX4)检测试剂盒

Hypoxia inducible factor 1 alpha (HIF-1 alpha) ELISA Kit 大鼠低氧诱导因子1α(HIF-1α)检测试剂盒

Human5-lipoxygenase,5-LO/LOXELISAKit 人5脂加氧酶(5-LO/LOX)检测试剂盒 96T/48T 进口分装

CLIAKitfor15-LO/LOX(Mouse15-lipoxygenase)ELISAKit小鼠15脂加氧酶

饮料比色法定量检测试剂盒20次

MouseLeptieceptor,LR/Ob-RELISAKit小鼠苗条素受体(LR/Ob-R)检测试剂盒规格：96T/48T

CDNF重组小鼠 CDNF / ARMETL1 蛋白 Protein

ADM R, Adrenomedullin receptor 肾上腺髓质素受体(抗原 0.5mgADM R, Adrenomedullin receptor 肾上腺髓质素受体(抗原)

CDK2AP2重组人 CDK2AP2 蛋白 Protein

IL1B Protein Human 重组人 IL-1 beta / IL1B 蛋白 (pro form, His 标签)

F11R Protein Rat 重组大鼠 JAM-A / F11R 蛋白 (Fc 标签)

ADM R, Adrenomedullin receptor 肾上腺髓质素受体(抗原 0.5mgADM R, Adrenomedullin receptor 肾上腺髓质素受体(抗原)

IL1B Protein Human 重组人 IL-1 beta / IL1B 蛋白 (pro form, His 标签)

CDNF重组小鼠 CDNF / ARMETL1 蛋白 Protein

F11R Protein Rat 重组大鼠 JAM-A / F11R 蛋白 (Fc 标签)

CDK2AP2重组人 CDK2AP2 蛋白 Protein

豚鼠巨噬细胞移动抑制因子(MIF)检测试剂盒 ，英文名： MIF ELISA Kit

Human amyloid precursor protein (APP) ELISA Kit 人淀粉样前体蛋白(βAPP)检测试剂盒

MonkeyIerleukin1,IL-1ELISAKit白介素1(IL-1)检测试剂盒 96T/48T 进口分装

CLIAKitforBGP(Osteocalcin/BoneGla-protein)ELISAKit兔骨钙素检测试剂盒

细菌氢/ATP酶(H+/K+-ATPase)活性比色法定量检测试剂盒20次

RabbitIerleukin9,IL-9ELISAKit兔子白介素9(IL-9)检测试剂盒规格：96T/48T

兔小梁网细胞乳酸（LD）测试盒（测全血）   Lactic acid (LD) test case (whole blood)

乳酸（LD）测试盒（测血清、组织等）   Lactic acid (LD) test case (serum, tissue, etc.)

乳酸脱氢酶（LDH）测试盒   Lactate dehydrogenase (LDH) test kit

苹果酸脱氢酶测试盒（测血清）   Apple acid dehydrogenase test case (Ce Xueqing)

注意事项：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象，若有上述现象发生请及时和尊龙凯时联系。

2. 仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息，如细胞形态、所用培养基、血清比例、所需细胞因子等，确保细胞培养条件一致，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题，责任由客户自行承担。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面，显微镜下观察细胞状态。因运输问题，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片，是正常现象。观察好细胞状态后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h。

4. 贴壁细胞可以消化，悬浮细胞直接混匀收集细胞，900 rpm-1000 rpm离心3 min，弃上清。加5 mL PBS重悬细胞，再900 rpm-1000 rpm离心3 min，，用新鲜的*培养基重悬细胞，并接种到新的培养瓶或培养皿中，置于培养箱中进行培养。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片，记录细胞状态，便于和我司技术部沟通交流。由于运输的原因，个别敏感细胞会出现不稳定的情况，请及时和尊龙凯时联系，告知细胞的具体情况，以便尊龙凯时的技术人员跟踪回访直至问题解决。

7. 该细胞仅供科研使用。

8. 备注：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞。收到细胞后次传代建议1：2传代 。

9.注意： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿。不是1个T25瓶传2个10cm皿。