细胞简介：

小鼠胚胎肢芽间充质干分离自胚胎肢芽；胚胎肢芽存在于两栖类以上的大多数脊椎动物胚胎中，在四肢发生的初期阶段，在身体两侧有呈芽状的突起，内部是中胚层侧板的体壁板垱厚形成，表面有表皮覆盖。在这个中胚层区肢芽迅速伸长，不久，在其前端即见有指的突起。在此时期间，其内部的中胚层分化成软骨、肌肉等。这些分化组织，在将肢芽作分离培养的时候也可以获得。根据对两栖类的有尾类的研究，作为肢原基各部的胚发能力，肢芽物质的大部分是位于背半部，而前半部主要参与基部形成，后半部参与前端的形成。在实验上，即使将肢的原基分成二半，每一半调整好都可形成基本上近于正常形态的肢体，而且肢体各轴的极性和侧性也逐渐决定。间充质干细胞（MSC）是属于中胚层的一类多能干细胞，主要存在于结缔组织和器官间质中，是具有高度自我更新和多向分化潜能的干细胞；这些细胞可以通过分裂维持自身细胞的特性和数量，并在特定条件下转变成为一种或多种构成机体组织或器官的细胞，从而在组织修复等方面发挥积极作用。

方法简介：

实验室分离的小鼠胚胎肢芽间充质干采用-胶原酶联合消化法制备而来，细胞总量约为5×10⁵cells/瓶。

质量检测

实验室分离的小鼠胚胎肢芽间充质干经CD90免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

培养信息：

培养基：含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等

换液频率：每2-3天换液一次

生长特性：贴壁

细胞形态：成纤维细胞样

传代特性：可传2-3代

消化液：0.25%

培养条件：气相：空气，95%；CO2，5%

小鼠胚胎肢芽间充质干体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的佳培养状态。

实验报告：

一、分离与培养：

1、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次，将组织剪成1mm3左右大小；

2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶），混悬10s，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；

3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次，直至组织被消化；

4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养；

5、差速贴壁1h后，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养；二、免疫荧光鉴定：

1、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min；

2、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min；

4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；

5、PBS冲洗细胞3次，每次10min，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h；

6、用PBS冲洗3次，每次10min，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。

公司正在出售的产品：

大鼠内皮型合酶(NOS3)检测试剂盒 ，英文名： NOS3 ELISA Kit

Mouse platelet derived growth factor BB (PDGF-BB) ELISA Kit 小鼠血小板衍生生长因子BB(PDGF-BB)检测试剂盒

RatIerleukin23,IL-23ELISAKit 大鼠白介素23(IL-23)检测试剂盒 96T/48T 进口分装

CLIAKitforGLP-1HA(Mouseghcagons-likepepfide1)ELISAKit小鼠胰高血糖素样肽1

细胞冯库萨(VONKOSSA)钙染色试剂盒50次

RatSomatostatin,SSELISAKit大鼠(SS)检测试剂盒规格：96T/48T

EPCAM重组食蟹猴 / 恒河猴 EpCAM / TROP-1 / TACSTD1 蛋白 Protein

IL-1 Alpha (Interleukin-1 Alpha 0.5mgIL-1 Alpha (Interleukin-1 Alpha ) 白介素1α抗原

DAPK3重组人 DAPK3 / ZIPK 蛋白 (GST 标签) Protein

CXCL11 Protein Human 重组人 I-TAC / CXCL11 蛋白

AARS Protein Mouse 重组小鼠 AARS / alanyl-tRNA synthetase 蛋白

IL-1 Alpha (Interleukin-1 Alpha 0.5mgIL-1 Alpha (Interleukin-1 Alpha ) 白介素1α抗原

CXCL11 Protein Human 重组人 I-TAC / CXCL11 蛋白

EPCAM重组食蟹猴 / 恒河猴 EpCAM / TROP-1 / TACSTD1 蛋白 Protein

AARS Protein Mouse 重组小鼠 AARS / alanyl-tRNA synthetase 蛋白

DAPK3重组人 DAPK3 / ZIPK 蛋白 (GST 标签) Protein

小鼠瘤病毒18(HPV-18)检测试剂盒 96T/48T

Human endostatin (ES) ELISA Kit 人内皮抑素(ES)检测试剂盒

Humanarabinogalactanproteins,AGPsELISAKit 人阿拉伯半乳糖蛋白(AGPs)检测试剂盒 96T/48T 进口分装

GuineapigEpidermalgrowthfactor,EGF检测试剂盒豚鼠表皮生长因子(EGF)检测试剂盒规格：96T/48T

真菌/酵母/ATP酶(Na+/K+-ATPase)活性比色法定量检测试剂盒20次

Mousecholesterolesteransferprotein,CETPELISAKit小鼠酯转移蛋白(CETP)检测试剂盒规格：96T/48T

小鼠胚胎肢芽间充质干细胞小鼠巨噬细胞性蛋白-1α   英文名称：   Macrophage Inflammatory protein 1α   规格：      英文缩写：   MIP-1α/CCL3

小鼠N-甲基-D-天门冬酸受体亚单位1型   英文名称：   Mouse N-methyl-D-aspaate receptor 1   规格：      英文缩写：   NMDA-R1

小鼠去甲上腺素   英文名称：   Mouse Nor   规格：      英文缩写：   NADR

小鼠非肌性肌球蛋白重链9   英文名称：   nonMyosin Heavy Chain 9   规格：      英文缩写：   nonMYH9hc

注意事项：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象，若有上述现象发生请及时和尊龙凯时联系。

2. 仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息，如细胞形态、所用培养基、血清比例、所需细胞因子等，确保细胞培养条件一致，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题，责任由客户自行承担。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面，显微镜下观察细胞状态。因运输问题，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片，是正常现象。观察好细胞状态后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h。

4. 贴壁细胞可以消化，悬浮细胞直接混匀收集细胞，900 rpm-1000 rpm离心3 min，弃上清。加5 mL PBS重悬细胞，再900 rpm-1000 rpm离心3 min，，用新鲜的*培养基重悬细胞，并接种到新的培养瓶或培养皿中，置于培养箱中进行培养。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片，记录细胞状态，便于和我司技术部沟通交流。由于运输的原因，个别敏感细胞会出现不稳定的情况，请及时和尊龙凯时联系，告知细胞的具体情况，以便尊龙凯时的技术人员跟踪回访直至问题解决。

7. 该细胞仅供科研使用。

8. 备注：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞。收到细胞后次传代建议1：2传代 。

9.注意： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿。不是1个T25瓶传2个10cm皿。