实验报告：

一、分离与培养：

1、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次，将组织剪成1mm3左右大小；

2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶），混悬10s，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；

3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次，直至组织被消化；

4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养；

5、差速贴壁1h后，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养；二、免疫荧光鉴定：

1、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min；

2、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min；

4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；

5、PBS冲洗细胞3次，每次10min，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h；

6、用PBS冲洗3次，每次10min，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。

细胞简介：

小鼠腮腺分离自腮腺组织；腮腺是哺乳类动物口腔中位于下颌角处的大唾液腺，位于外耳道的前下方，下颌后窝内及下颌支的深面。腮腺也是某些无尾目动物颈部有毒皮肤腺的聚集体；唾液腺有3对，腮腺、舌下腺和颌下腺，其中大的一对是腮腺。腮腺细胞是高度分化的上皮源性细胞，是一种营养需要复杂、在一般合成培养基中不易生长，体外培养比较困难。目前，DMEM培养液被认为较适于腺细胞的培养。加入一定量的血清更有利于细胞的生长、增殖与分化。另外，接种的细胞密度也是培养成功的关键因素之一，尤其是在腺细胞这种单层细胞培养时，接种的细胞总数量和生长基质表面的细胞密度对整个细胞的生长均有影响。

方法简介：

公司实验室分离的小鼠腮腺采用胶原酶-联合消化后差速贴壁，结合上皮细胞专用培养基培养筛选制备而来，总量约为5×10?cells/瓶。

质量检测

公司实验室分离的小鼠腮腺经PCK免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

培养信息：

包被条件 鼠尾胶原Ⅰ（2-5μg/cm2）

培养基 含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等

换液频率 每2-3天换液一次

生长特性 贴壁

细胞形态 梭形、多角形

传代特性 可传1-2代

消化液 0.25%

培养条件 气相：空气，95%；CO2，5%

注意事项：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象，若有上述现象发生请及时和尊龙凯时联系。

2. 仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息，如细胞形态、所用培养基、血清比例、所需细胞因子等，确保细胞培养条件一致，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题，责任由客户自行承担。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面，显微镜下观察细胞状态。因运输问题，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片，是正常现象。观察好细胞状态后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h。

4. 贴壁细胞可以消化，悬浮细胞直接混匀收集细胞，900 rpm-1000 rpm离心3 min，弃上清。加5 mL PBS重悬细胞，再900 rpm-1000 rpm离心3 min，，用新鲜的*培养基重悬细胞，并接种到新的培养瓶或培养皿中，置于培养箱中进行培养。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片，记录细胞状态，便于和我司技术部沟通交流。由于运输的原因，个别敏感细胞会出现不稳定的情况，请及时和尊龙凯时联系，告知细胞的具体情况，以便尊龙凯时的技术人员跟踪回访直至问题解决。

7. 该细胞仅供科研使用。

8. 备注：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞。收到细胞后次传代建议1：2传代 。

9.注意： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿。不是1个T25瓶传2个10cm皿。

公司正在出售的产品：

大鼠糖原0酸化酶M(PYGM)检测试剂盒 ，英文名： PYGM ELISA Kit

Mouse placea growth factor (PLGF) ELISA Kit 小鼠胎盘生长因子(PLGF)检测试剂盒

Rat17-Hydroxyprogesterone,17-OHPELISAKit 大鼠17羟孕酮(17-OHP)检测试剂盒 96T/48T 进口分装

CLIAKitforH-4(umanNeuroophin4)ELISAKIT人神经营养因子4

细胞PKCδ激酶活性定量检测试剂盒(A/B/C)20次

ELISAKi-proBNP大鼠N端前脑素

FCGR2B重组食蟹猴 CD32b / FCGR2B 蛋白 Protein

MT-II(Melanotan II Acetate 1gMT-II(Melanotan II Acetate) 醋酸美拉诺坦II

IL9重组人 IL-9 / Interleukin-9 蛋白 Protein

CYGB Protein Human 重组人 Cytoglobin / CYGB 蛋白

AKT3 Protein Mouse 重组小鼠 AKT3 蛋白 (aa 106-479, His & GST 标签)

MT-II(Melanotan II Acetate 1gMT-II(Melanotan II Acetate) 醋酸美拉诺坦II

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FCGR2B重组食蟹猴 CD32b / FCGR2B 蛋白 Protein

AKT3 Protein Mouse 重组小鼠 AKT3 蛋白 (aa 106-479, His & GST 标签)

IL9重组人 IL-9 / Interleukin-9 蛋白 Protein

小鼠0酸肌醇3激酶(PI3K)ELISA 试剂盒 试剂盒 组装/原装

Rat desmin (Des) ELISA Kit 大鼠结蛋白(Des)检测试剂盒

Humancardiacisoformofopni,cELISAKit 人心肌特异性肌钙蛋白T(c)检测试剂盒 96T/48T 进口分装

Humanadenosinedeaminase,ADA检测试剂盒人腺苷脱氨酶(ADA)检测试剂盒规格：96T/48T

直肠标记K-ras粪便检测突变荧光分析试剂盒50次

Mousealpha-granularmembraneprotein,GMP-140ELISAKit小鼠血浆α颗粒膜蛋白(GMP-140)检测试剂盒规格：96T/48T

小鼠腮腺细胞小鼠角化细胞内分泌因子(KAF)/双调蛋白(AR)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

小鼠活化素A(ACV-A)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

小鼠脑源性神经营养因子(BDNF)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

小鼠骨成型蛋白2(BMP-2)ELISAKit   ELISA.   96T/48T