荧光定量PCR实验步骤:
①取冻存已裂解的细胞,室温放置5分钟使其*溶解。
②两相分离 每1ml的TRIZOL试剂裂解的样品中加入0.2ml的lvfang,盖紧管盖。手动剧烈振荡管体15秒后,15到30℃孵育2到3分钟。4℃下12000rpm离心15分钟。离心后混合液体将分为下层的红色酚lvfang相,中间层以及无色水相上层。RNA全部被分配于水相中。水相上层的体积大约是匀浆时加入的TRIZOL试剂的60%。
③RNA沉淀 将水相上层转移到一干净无RNA酶的离心管中。加等体积异丙醇混合以沉淀其中的RNA,混匀后15到30℃孵育10分钟后,于4℃下12000rpm 离心10分钟。此时离心前不可见的RNA沉淀将在管底部和侧壁上形成胶状沉淀块。
④RNA清洗 移去上清液,每1mlTRIZOL试剂裂解的样品中加入至少1ml的75%乙醇(75%乙醇用DEPCH2O配制),清洗RNA沉淀。混匀后,4℃下7000rpm离心5分钟。
⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液,使RNA沉淀在室温空气中干燥5-10分钟。
⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA时,先加入无RNA酶的水40μl用枪反复吹打几次,使其*溶解,获得的RNA溶液保存于-80℃待用。 1)紫外吸收法测定先用稀释用的TE溶液将分光光度计调零。然后取少量RNA溶液用TE稀释(1:100)后,读取其在分光光度计260nm和280nm处的吸收值,测定RNA溶液 浓度和纯度。
转录因子E2F-1抗体
内皮素转化酶1抗体
细胞外基质蛋白1抗体
外胚层发育不良抗体
E2 tag标签抗体
铁螯合酶抗体
DH5α大肠杆菌菌体蛋白抗体
磷酸化丝裂原活化蛋白激酶1/2抗体
上皮细胞粘附分子抗体
表皮生长因子抗体
表皮生长因子受体3抗体
上皮钙粘附分子抗体
红细胞生成素受体抗体
脑啡肽抗体
EID2蛋白抗体
上皮细胞粘附分子抗体
红细胞膜相关蛋白ERMAP抗体
腺样癌特异性相关抗原抗体EMC1抗体
腺样癌特异性相关抗原抗体EMC1抗体
染色体区域稳定蛋白/核输出蛋白1抗体