细胞简介：

大鼠Ⅱ型肺泡上皮分离自肺组织；肺泡由单层上皮细胞构成的半球状囊泡。肺中的支气管经多次反复分枝成无数细支气管，它们的末端膨大成囊，囊的四周有很多突出的小囊泡，即为肺泡。小肺泡细胞，又称I型肺泡细胞，厚约0.1微米，基底部是基底膜，无增殖能力。大肺泡细胞，又称Ⅱ型肺泡细胞，分泌表面活性物质（二棕榈酰），以降低肺泡表面张力。Ⅱ型肺泡细胞位于Ⅰ型肺泡细胞之间，数量较Ⅰ型肺泡细胞多，但覆盖面积比Ⅰ型肺泡细胞小。细胞立方形或圆形,顶端突入肺泡腔。细胞核圆形，胞质着色浅、呈泡沫状。电镜下，细胞游离而有少量微绒毛，胞质内富含线粒体和溶酶体，有较发达的粗面内质网和高尔基复合体。核上方有较多的分泌颗粒，电子密度高、大小不等，直径约0.1-1.0μm颗粒内含有平行排列的板层状结构，称为嗜饿性板层小体。小体内的主要成分为磷脂，以二棕榈酰为主，此外还有糖胺多糖及蛋白质等。颗粒内物质释放出来后，在肺泡表面形成一层粘液层，称为表面活性物质（surfactant）。表面活性物质有降低肺泡表面张力、稳定肺泡大小的作用。呼气时肺泡缩小，表面活性物质密度增加，表面张力降低，防止肺泡过度塌陷；吸气时肺泡扩张，表面活性物质密度减小，肺泡回缩力加大，可防止肺泡过度膨胀。表面活性物质的缺乏或变性均可引起肺不张，过度通气可造成表面活性物质缺乏；吸入毒气可直接破坏表面活性物质。Ⅱ型肺泡细胞有分裂、增殖并分化为Ⅰ型肺泡细胞的潜能，故具有修复受损伤上皮的作用。

方法简介：

公司实验室分离的大鼠Ⅱ型肺泡上皮采用弹性蛋白酶灌注消化法结合差速贴壁法，并通过上皮细胞专用培养基培养筛选制备而来，细胞总量约为5×10?cells/瓶。

质量检测

公司实验室分离的大鼠Ⅱ型肺泡上皮经SP-C免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

培养信息：

包被条件 鼠尾胶原Ⅰ（2-5μg/cm2）

培养基 含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等

换液频率 每2-3天换液一次

生长特性 贴壁

细胞形态 上皮细胞样

传代特性 可传1-2代

消化液 0.25%

培养条件 气相：空气，95%；CO2，5%

实验报告：

一、分离与培养：

1、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次，将组织剪成1mm3左右大小；

2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶），混悬10s，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；

3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次，直至组织被消化；

4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养；

5、差速贴壁1h后，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养；二、免疫荧光鉴定：

1、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min；

2、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min；

4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；

5、PBS冲洗细胞3次，每次10min，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h；

6、用PBS冲洗3次，每次10min，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。

公司正在出售的产品：

小鼠血管紧张素 I (mouse ANG I)   作用：   ELISA   规格：   96T   美国 Phoenix

小鼠血管紧张素 II (mouse ANG II)   作用：   ELISA   规格：   96T   美国 Phoenix

mouse CD 40L ELISA Kit   作用：   ELISA   规格：   96T   奥地利 Bender

大鼠 C 反应蛋白 (rat CRP)   作用：   ELISA   规格：   96T   美国 ADI

小鼠仙台病毒(Sendai)试剂盒 96T/48T

Rat bone morphogenetic protein 4 (BMP-4) ELISA Kit 大鼠骨成型蛋白4(BMP-4)试剂盒

Humanproteinase-aineuophilcytoplasmicaibody,PR3-ANCAELISAKit 人蛋白酶3特异性抗中性粒细胞胞质抗体(PR3-ANCA)试剂盒 96T/48T 进口分装

Chickenheparansulfate,HS试剂盒鸡类肝素(HS)试剂盒规格：96T/48T

载玻片细胞CDK4蛋白表达荧光显微镜试剂盒10/20次

MouseHeatShockProtein70,Hsp-70ELISAKit小鼠热休克蛋白70(HSP-70)试剂盒规格：96T/48T

CCL2重组小鼠 CCL2 / MCP-1 / MCP1 蛋白 Protein

1α(MEP1α)重组蛋白 Recombinant Meprin A Alpha (MEP1a)

RIOK1重组人 RIOK1 / RIO kinase 1 蛋白 (His & GST 标签) Protein

CDC37 Protein Human 重组人 CDC37 / CDC37A 蛋白 (GST 标签)

IgG Protein Rabbit 重组兔 IgG-Fc 蛋白 (185 Thr/Ala, Asn 284/Ser)

1α(MEP1α)重组蛋白 Recombinant Meprin A Alpha (MEP1a)

CDC37 Protein Human 重组人 CDC37 / CDC37A 蛋白 (GST 标签)

CCL2重组小鼠 CCL2 / MCP-1 / MCP1 蛋白 Protein

IgG Protein Rabbit 重组兔 IgG-Fc 蛋白 (185 Thr/Ala, Asn 284/Ser)

RIOK1重组人 RIOK1 / RIO kinase 1 蛋白 (His & GST 标签) Protein

大鼠Ⅱ型肺泡上皮细胞猪组织因子(TF)ELISA 试剂盒

Peroxisome proliferator activated receptor alpha (PPAR- alpha) ELISA Kit 人过氧化物酶体增殖物激活受体α(PPAR-α)试剂盒

Rabbitalpha-granularmembraneprotein,GMP-140ELISAKit 兔血浆α颗粒膜蛋白(GMP-140)试剂盒 96T/48T 进口分装

CLIAKitforApo-H(HumanApolipoproteinH)ELISAKit人载脂蛋白H

溴脱氧尿核苷(BrdU)溶液(100毫摩尔)1毫升

Porcinemyelinbasicprotein,MBPELISAKit猪髓0脂碱性蛋白(MBP)试剂盒规格：96T/48T

注意事项：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象，若有上述现象发生请及时和尊龙凯时联系。

2. 仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息，如细胞形态、所用培养基、血清比例、所需细胞因子等，确保细胞培养条件一致，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题，责任由客户自行承担。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面，显微镜下观察细胞状态。因运输问题，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片，是正常现象。观察好细胞状态后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h。

4. 贴壁细胞可以消化，悬浮细胞直接混匀收集细胞，900 rpm-1000 rpm离心3 min，弃上清。加5 mL PBS重悬细胞，再900 rpm-1000 rpm离心3 min，，用新鲜的*培养基重悬细胞，并接种到新的培养瓶或培养皿中，置于培养箱中进行培养。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片，记录细胞状态，便于和我司技术部沟通交流。由于运输的原因，个别敏感细胞会出现不稳定的情况，请及时和尊龙凯时联系，告知细胞的具体情况，以便尊龙凯时的技术人员跟踪回访直至问题解决。

7. 该细胞仅供科研使用。

8. 备注：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞。收到细胞后次传代建议1：2传代 。

9.注意： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿。不是1个T25瓶传2个10cm皿。