细胞简介：

大鼠鼻黏膜成纤维分离自鼻黏膜组织；黏膜是覆盖在机体内消化、呼吸、泌尿、生殖等器官管腔内壁的一层组织结构，由上皮组织和疏松结缔组织构成。根据部位不同，有口腔黏膜、胃肠黏膜、鼻腔黏膜、气管黏膜、阴道黏膜、眼睑黏膜等不同名称。它们的结构也因功能、部位不一而不尽相同。鼻腔黏膜，简称鼻黏膜，覆盖于鼻腔表面，黏膜下方为软骨、骨或骨骼肌。成纤维细胞是结缔组织的主要细胞成分，由胚胎时期的间充质细胞分化而来。成纤维细胞较大，轮廓清楚，多为突起的纺锤形或星形的扁平状结构，其细胞核呈规则的卵圆形，核仁大而明显。成纤维细胞功能活动旺盛，细胞质嗜弱碱性，具明显的蛋白质合成和分泌活动，在一定条件下，它可以实现跟纤维细胞的互相转化；成纤维细胞对不同程度的细胞变性、坏死和组织缺损的修复有着十分重要的作用。刚分离的成纤维细胞呈圆形、折光性良好，悬浮于培养基中。30min细胞贴壁，其中部分开始伸出伪足，表现为小的突起；6h后细胞基本贴壁，伸展成梭形，胞核清晰，分布较均匀，散在生长，不聚集成团；细胞排列紧密，有的交叉重叠生长，平坦、胞体较大，细胞质透明，细胞核较大，呈椭圆形，颜色淡。细胞融合，并彼此连接成网状；细胞呈突起的纺锤形或星形的扁平分布。

方法简介：

实验室分离的大鼠鼻黏膜成纤维采用-胶原酶混合消化法结合差速贴壁法，并通过成纤维细胞专用培养基培养筛选制备而来，细胞总量约为5×10⁵cells/瓶。

质量检测

实验室分离的大鼠鼻黏膜成纤维经Vimentin免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

培养信息：

培养基：含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等

换液频率：每2-3天换液一次

生长特性：贴壁

细胞形态：成纤维细胞样

传代特性：可传3代左右

消化液：0.25%

培养条件：气相：空气，95%；CO2，5%

体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的好培养状态。

实验报告：

一、分离与培养：

1、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次，将组织剪成1mm3左右大小；

2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶），混悬10s，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；

3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次，直至组织被消化；

4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养；

5、差速贴壁1h后，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养；二、免疫荧光鉴定：

1、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min；

2、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min；

4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；

5、PBS冲洗细胞3次，每次10min，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h；

6、用PBS冲洗3次，每次10min，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。

公司正在出售的产品：

大鼠1,4,5-三0酸肌醇(IP3)检测试剂盒 ，英文名： IP3 ELISA Kit

Mouse basic fibroblast growth factor 9 (bFGF-9) ELISA Kit 小鼠碱性成纤维细胞生长因子9(bFGF-9)检测试剂盒

Mouseadrenergicalpha-1Areceptor,ADRA1AELISAKit 小鼠能a1A受体(ADRA1A)检测试剂盒 96T/48T 进口分装

CLIAKitforHumanplasminogenactivatorinhibitor,PAIELISAKit人纤溶酶原激活物抑制因子

通用型总巯基含量比色法定量检测试剂盒20次

ELISAKitIgM大鼠免疫球蛋白M

FGFR4重组人 FGFR4 / FGF Receptor 4 蛋白 (Fc 标签) Protein

神经介素B(NMB)重组蛋白 Recombinant Neuromedin B (NMB)

CALCA重组人 CALCA / CGRP 蛋白 (Fc 标签) Protein

GPC5 Protein Human 重组人 Glypican 5 / GPC5 蛋白

HA Protein Influenza 重组甲型流感 H1N1 (A/Texas/05/2009) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 蛋白

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小鼠β血小板球蛋白/β血栓环蛋白(β-TG)ELISA 试剂盒 96T/48T

Rat kidney injury molecule 1 (Kim-1) ELISA Kit 大鼠肾损伤分子1(Kim-1)检测试剂盒

HumanCaldesmon,CALDELISAKit 人钙调结合蛋白(CALD)检测试剂盒 96T/48T 进口分装

HumanCCAAT/enhancerbindingproteinepsilon,C/EBPε检测试剂盒人CCAAT增强子结合蛋白ε(C/EBPε)检测试剂盒规格：96T/48T

转基因玉米Bt-Xa品系试剂盒20次

humanserum/glucocoicoidregulatedkinase2,GSK2ISAKIT人血清/糖皮质激素调节激酶2(GSK2)检测试剂盒规格：96T/48T

大鼠鼻黏膜成纤维细胞兔子β血小板球蛋白检测试剂盒   兔子β血小板球蛋白试剂盒   规格型号：96T/48T   兔子β血小板球蛋白试剂盒，规格型号：96T/48T，来源：检测试剂盒（进口分装），产品别名：兔子β血小板球蛋白试剂盒、兔子β血小板球蛋白酶检测试剂盒   保存条件：2-8℃   保质期：6个月。

还原酶检测试剂盒   还原酶试剂盒   规格型号：96T/48T   还原酶试剂盒，规格型号：96T/48T，来源：检测试剂盒（进口分装），产品别名：还原酶试剂盒、还原酶检测试剂盒   保存条件：2-8℃   保质期：6个月。

过氧化物酶检测试剂盒   过氧化物酶试剂盒   规格型号：96T/48T   过氧化物酶试剂盒，规格型号：96T/48T，来源：检测试剂盒（进口分装），产品别名：过氧化物酶试剂盒、过氧化物酶检测试剂盒   保存条件：2-8℃   保质期：6个月。

S-转移酶检测试剂盒   S-转移酶试剂盒   规格型号：96T/48T   S-转移酶试剂盒，规格型号：96T/48T，来源：检测试剂盒（进口分装），产品别名：S-转移酶试剂盒、S-转移酶检测试剂盒   保存条件：2-8℃   保质期：6个月。

注意事项：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象，若有上述现象发生请及时和尊龙凯时联系。

2. 仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息，如细胞形态、所用培养基、血清比例、所需细胞因子等，确保细胞培养条件一致，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题，责任由客户自行承担。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面，显微镜下观察细胞状态。因运输问题，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片，是正常现象。观察好细胞状态后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h。

4. 贴壁细胞可以消化，悬浮细胞直接混匀收集细胞，900 rpm-1000 rpm离心3 min，弃上清。加5 mL PBS重悬细胞，再900 rpm-1000 rpm离心3 min，，用新鲜的*培养基重悬细胞，并接种到新的培养瓶或培养皿中，置于培养箱中进行培养。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片，记录细胞状态，便于和我司技术部沟通交流。由于运输的原因，个别敏感细胞会出现不稳定的情况，请及时和尊龙凯时联系，告知细胞的具体情况，以便尊龙凯时的技术人员跟踪回访直至问题解决。

7. 该细胞仅供科研使用。

8. 备注：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞。收到细胞后次传代建议1：2传代 。

9.注意： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿。不是1个T25瓶传2个10cm皿。