实验报告：

一、分离与培养：

1、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次，将组织剪成1mm3左右大小；

2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶），混悬10s，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；

3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次，直至组织被消化；

4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养；

5、差速贴壁1h后，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养；二、免疫荧光鉴定：

1、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min；

2、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min；

4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；

5、PBS冲洗细胞3次，每次10min，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h；

6、用PBS冲洗3次，每次10min，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。

细胞简介：

大鼠脑静脉血管内皮分离自脑静脉组织；与脑动脉相比，脑静脉管壁较薄。与身体其他部位的静脉不同，脑静脉管壁中没有静脉瓣，静脉血的回流依赖高位的势能。脑静脉血的回流路径可以归纳为：大部脑静脉血经脑深部静脉和脑血窦流入颈内静脉医|学教育网搜集整理；小部脑静脉血经眼部翼状静脉丛，进入静脉导血管再到头皮，最后流入椎管中的椎旁静脉系统。脑静脉系统有大量交通枝静脉丛，即使两侧颈内静脉都被阻塞，大脑静脉血仍可经椎静脉和颈外静脉系统完成其回流。脑静脉血管内皮细胞的主要功能是维持血管内外的动态平衡，合成和分泌细胞因子和介质参与免疫反应，维持凝血和纤溶的动态平衡。

方法简介：

公司实验室分离的大鼠脑静脉血管内皮采用-胶原酶联合消化法结合差速贴壁法、并通过内皮细胞专用培养基培养筛选制备而来，细胞总量约为5×10?cells/瓶。

质量检测

公司实验室分离的大鼠脑静脉血管内皮经CD31免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

培养信息：

包被条件 PLL（0.1mg/ml），明胶（0.1%）

培养基 含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等

换液频率 每2-3天换液一次

生长特性 贴壁

细胞形态 内皮细胞样

传代特性 可传2-3代

消化液 0.25%

培养条件 气相：空气，95%；CO2，5%

注意事项：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象，若有上述现象发生请及时和尊龙凯时联系。

2. 仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息，如细胞形态、所用培养基、血清比例、所需细胞因子等，确保细胞培养条件一致，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题，责任由客户自行承担。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面，显微镜下观察细胞状态。因运输问题，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片，是正常现象。观察好细胞状态后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h。

4. 贴壁细胞可以消化，悬浮细胞直接混匀收集细胞，900 rpm-1000 rpm离心3 min，弃上清。加5 mL PBS重悬细胞，再900 rpm-1000 rpm离心3 min，，用新鲜的*培养基重悬细胞，并接种到新的培养瓶或培养皿中，置于培养箱中进行培养。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片，记录细胞状态，便于和我司技术部沟通交流。由于运输的原因，个别敏感细胞会出现不稳定的情况，请及时和尊龙凯时联系，告知细胞的具体情况，以便尊龙凯时的技术人员跟踪回访直至问题解决。

7. 该细胞仅供科研使用。

8. 备注：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞。收到细胞后次传代建议1：2传代 。

9.注意： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿。不是1个T25瓶传2个10cm皿。

公司正在出售的产品：

大鼠基质金属蛋白酶16(MMP16)检测试剂盒 ，英文名： MMP16 ELISA Kit

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Ratypsinogenactivationpeptide,TAPELISAKit 大鼠原激活肽(TAP)检测试剂盒 96T/48T 进口分装

CLIAKitforF1+2(Humanprothrombinfragme1+2)ELISAkit人原片段F1+2

细胞结构型内皮细胞合成酶(cNOS/NOS3/eNOS)活性比色法定量检测试剂盒20次

Ratmyelinbasicprotein,MBPELISAKit大鼠髓0脂碱性蛋白(MBP)检测试剂盒规格：96T/48T

VTCN1重组小鼠 B7-H4 / B7S1 / B7x 蛋白 (Fc 标签) Protein

白介素8受体α(IL8Rα)重组蛋白 Recombinant Interleukin 8 Receptor Alpha (IL8Ra)

IL1R2重组人 IL1R2 / IL1RB / CD121b 蛋白 Protein

FABP2 Protein Human 重组人 FABP2 / I-FABP 蛋白

PDCD1LG2 Protein Cynomolgus 重组食蟹猴 B7-DC / PD-L2 / CD273 蛋白

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PDCD1LG2 Protein Cynomolgus 重组食蟹猴 B7-DC / PD-L2 / CD273 蛋白

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小鼠汉坦病毒(HV)检测试剂盒 96T/48T

Adrenaline (EPI) ELISA Kit 人(EPI)检测试剂盒

humanEndothelin1,ET-1ELISAKit 人内皮素1(ET-1)检测试剂盒 96T/48T 进口分装

Humanai-parainfluenzavirusIgMaibody,ai-PIVIgM检测试剂盒人抗副流感病毒IgM抗体(ai-PIVIgM)检测试剂盒规格：96T/48T

植物细胞壁钙荧光白(Calcofluorwhite;CFW)荧光染色试剂盒20次

Humayrosinekinasewithimmunoglobulin-likeandEGF-likedomains2,Tie-2ELISAKit人血管生成素受体/含免疫球蛋白样环和上皮生长因子样域酪激酶2(Tie-2)检测试剂盒规格：96T/48T

大鼠脑静脉血管内皮细胞小鼠α羟基脱氢酶(αHBDH)检测试剂盒   96T/48T   试剂盒   组装/原装

小鼠α葡萄糖苷酶(α-glucosidase)检测试剂盒   96T/48T   试剂盒   组装/原装

小鼠αS转移酶(α-GST)检测试剂盒   96T/48T   试剂盒   组装/原装

小鼠α甘露糖苷酶(αManase)检测试剂盒   96T/48T   试剂盒   组装/原装