实验报告：

一、分离与培养：

1、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次，将组织剪成1mm3左右大小；

2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶），混悬10s，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；

3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次，直至组织被消化；

4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养；

5、差速贴壁1h后，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养；二、免疫荧光鉴定：

1、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min；

2、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min；

4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；

5、PBS冲洗细胞3次，每次10min，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h；

6、用PBS冲洗3次，每次10min，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。

细胞简介：

小鼠微血管周分离自微血管组织；周细胞（pericyte）又称Rouget细胞和壁细胞，是一种包围全身毛细血管和静脉中内皮细胞的细胞，可以收缩。周细胞嵌入毛细血管内皮细胞的基膜中，通过物理接触和旁分泌信号与内皮细胞进行细胞通讯，监视和稳定内皮细胞的成熟过程。此外，周细胞还具有调控毛细血管血流量、细胞碎屑清除和吞噬以及血脑屏障渗透性的作用，其多功能性是目前研究的热点之一，所以对血管周细胞的生物学特征、标记物、细胞功能等的研究都为相关研究提供基础资料。周细胞产生手指状的外延以调控毛细血管的血流量。周细胞和内皮细胞之间共同拥有一个基膜，基膜上有多种细胞连接，包括多种整合素、神经钙黏素、纤连蛋白以及接合素。它还参与毛细血管直径的双向调控；毛细血管受损时，周细胞还可增殖，分化为内皮细胞和成纤维细胞。

方法简介：

公司实验室分离的小鼠血管周采用胶原酶-联合消化法及不锈钢网筛过滤法结合密度梯度离心法制备而来，细胞总量约为5×10?cells/瓶。

质量检测

公司实验室分离的小鼠微血管周经alpha-SMA免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

培养信息：

培养基 含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等

换液频率 每2-3天换液一次

生长特性 贴壁

细胞形态 成纤维细胞样

传代特性 可传3代左右

消化液 0.25%

培养条件 气相：空气，95%；CO2，5%

注意事项：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象，若有上述现象发生请及时和尊龙凯时联系。

2. 仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息，如细胞形态、所用培养基、血清比例、所需细胞因子等，确保细胞培养条件一致，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题，责任由客户自行承担。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面，显微镜下观察细胞状态。因运输问题，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片，是正常现象。观察好细胞状态后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h。

4. 贴壁细胞可以消化，悬浮细胞直接混匀收集细胞，900 rpm-1000 rpm离心3 min，弃上清。加5 mL PBS重悬细胞，再900 rpm-1000 rpm离心3 min，，用新鲜的*培养基重悬细胞，并接种到新的培养瓶或培养皿中，置于培养箱中进行培养。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片，记录细胞状态，便于和我司技术部沟通交流。由于运输的原因，个别敏感细胞会出现不稳定的情况，请及时和尊龙凯时联系，告知细胞的具体情况，以便尊龙凯时的技术人员跟踪回访直至问题解决。

7. 该细胞仅供科研使用。

8. 备注：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞。收到细胞后次传代建议1：2传代 。

9.注意： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿。不是1个T25瓶传2个10cm皿。

公司正在出售的产品：

大鼠Agoi相关蛋白(AGRP)检测试剂盒 ，英文名： AGRP ELISA Kit

Mouse osteopoin (OPN) ELISA Kit 小鼠骨桥素(OPN)检测试剂盒

Mousenuclearfactor-κBp65,NF-κBp65ELISAKit 小鼠核因子-κB亚基p65亲和肽(NF-κBp65)检测试剂盒 96T/48T 进口分装

CLIAKitforHumahrombopoietin,TPOELISAkit人血小板生成素

通用型羊弓形体刚地弓形虫(Toxotest;Toxoplasmagondii)试剂盒20次

ELISAKitHSP47大鼠热休克蛋白47

ERBB3重组恒河猴 HER3 / ErbB3 蛋白 Protein

Nanog fragment 干细胞关键蛋白(多肽 0.5mgNanog fragment 干细胞关键蛋白(多肽)

CA4重组人 Carbonic Anhydrase IV / CA4 蛋白 Protein

DDR2 Protein Human 重组人 DDR2 Kinase / CD167b 蛋白

CSNK2A1 Protein Mouse 重组小鼠 CSNK2A1 / CK2A1 蛋白

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小鼠可溶性白细胞分化抗原40配体(sCD40L)ELISA 试剂盒 96T/48T

Rat macrophage inflammatory protein 1 alpha (MIP-1 alpha /CCL3) ELISA Kit 大鼠巨噬细胞症蛋白1α(MIP-1α/CCL3)检测试剂盒

Humanheparinsulphateprotoglycans,HSPGELISAKit 人硫酸肝素糖蛋白(HSPG)检测试剂盒 96T/48T 进口分装

Humanalkalinephosphatase,ALP检测试剂盒人碱性0酸酶(ALP)检测试剂盒规格：96T/48T

植物V型氢ATP酶(H+-ATPase)活性比色法定量检测试剂盒20次

Mouse5-Hydroxyyptamine,5HTELISAKit小鼠5羟色胺(5-HT)检测试剂盒规格：96T/48T

小鼠微血管周细胞小鼠环0酸鸟苷   英文名称：   cyclic adenosine monophosphate   规格：      英文缩写：   cGMP

小鼠睫状神经营养因子   英文名称：   ciliary neuroophic factor   规格：      英文缩写：   CF

白细胞分化抗原14   英文名称：   cluster of differeiation aigen 14   规格：      英文缩写：   CD14

可溶性细胞表面分化抗原40配体   英文名称：   Soluble Cluster of differeiation aigen 40 ligand   规格：      英文缩写：   sCD40L